熒光金簇偶合魚藤酮的制備及其細(xì)胞成像.pdf

1、分類號：S481.1密級：碩士學(xué)位論文熒光金簇偶合魚藤酮的制備及其細(xì)胞成像劉慶樂第一指導(dǎo)教師：第一指導(dǎo)教師：徐漢虹教授第二指導(dǎo)教師：第二指導(dǎo)教師：學(xué)院名學(xué)院名稱：農(nóng)學(xué)院專業(yè)學(xué)位類別：專業(yè)學(xué)位類別：農(nóng)業(yè)推廣碩士領(lǐng)域：域：植物保護(hù)答辯委員會主席：答辯委員會主席：萬樹青教授中國廣州2016年6月摘要可視化農(nóng)藥分子在昆蟲細(xì)胞內(nèi)的吸收和分布有助于明確農(nóng)藥在昆蟲細(xì)胞內(nèi)的作用機(jī)理。本論文設(shè)計合成熒光納米金簇（AuNCs）與農(nóng)藥分子的偶合物，并對其在S

2、f9細(xì)胞內(nèi)的熒光成像，細(xì)胞毒性以及細(xì)胞吸收效果進(jìn)行了研究。以BSA為穩(wěn)定劑和還原劑，一步合成AuBSA（2.160.40nm），然后將甘氨酸（Gly）和魚藤酮（R）通過共價鍵偶聯(lián)到AuBSA上，首次制備了AuGlyR（2.930.49nm）偶合物，通過熒光光譜確定AuGlyR的最大激發(fā)和發(fā)射波長分別為424nm和496nm。通過紫外可見吸收（UVvis）光譜和紅外光譜（FTIR）進(jìn)行特征峰的光譜歸屬，證實了Gly和R是通過共價鍵偶聯(lián)到A

3、uBSA上。熱重分析（TGA）表明AuGlyR中偶聯(lián)上AuBSA的配體（Gly和R）所占比例為12.48%。細(xì)胞毒性實驗顯示當(dāng)Sf9細(xì)胞分別在含有25μgmL1金濃度下的AuBSA、AuR和AuGlyR培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h后，它們的細(xì)胞存活率都維持在80%以上，所以我們選擇在25μgmL1金濃度下做其他相關(guān)的生物實驗。體外細(xì)胞毒性實驗證明了AuGlyR的濃度在25μgmL1金濃度以下時，對細(xì)胞的毒性很低，可將其作為熒光探針在細(xì)胞成像中應(yīng)用

4、。在激光共聚焦顯微鏡（CLSM）下，可以觀察到AuGlyR培養(yǎng)的Sf9細(xì)胞在激光共聚焦顯微鏡下顯示出很強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光，而且可以看出這些藍(lán)色熒光大部分都分布在細(xì)胞質(zhì)。但是，AuBSA和AuR培養(yǎng)的Sf9細(xì)胞在激光共聚焦顯微鏡下沒有觀察到熒光，熒光成像的顯著差異說明了AuGlyR在Sf9細(xì)胞中吸收量比AuBSA和AuR顯著增多。這說明金簇表面偶聯(lián)的Gly能夠增強(qiáng)AuGlyR在Sf9細(xì)胞中的吸收。利用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICPMS）分析Sf

5、9細(xì)胞分別在含有AuBSA、AuR和AuGlyR的培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h后的細(xì)胞吸收率。結(jié)果顯示AuGlyR培養(yǎng)的Sf9細(xì)胞中的金含量分別是AuBSA和AuR培養(yǎng)的Sf9細(xì)胞中的金含量的2.2和2.6倍。這和激光共聚焦的實驗結(jié)果一致表明當(dāng)金簇表面偶聯(lián)Gly后，AuGlyR在Sf9細(xì)胞中的吸收也顯著增強(qiáng)，證明了AuGlyR在Sf9細(xì)胞中較高的吸收能力。以谷胱甘肽（GSH）為還原劑和穩(wěn)定劑，在堿性條件下合成熒光金簇（AuGSH），然后將R通過共