食品中羅丹明B免疫快速檢測(cè)技術(shù)的研究及應(yīng)用.pdf

1、羅丹明B（Rhodamine B，RB），俗稱花粉紅，是一種具有鮮桃紅色的人工合成的化工染料，具有致癌致突變作用。因具有價(jià)格低廉、色澤紅艷、穩(wěn)定性強(qiáng)等特點(diǎn)，常被不法分子用作辣椒粉、辣椒油及臘腸等調(diào)味品的染色劑，給人們的健康乃至社會(huì)帶來(lái)了極大的危害，因此研究食品中羅丹明B的檢測(cè)方法是迫切需要的。然而目前，檢測(cè)食品中RB方面的文獻(xiàn)至今未見報(bào)道，雖然RB被列為衛(wèi)生部首批公布的17種違禁食品添加物質(zhì)之一，但仍有違規(guī)應(yīng)用。因此研究RB的快速檢測(cè)與

2、鑒定方法具有重大意義。
　　本文通過(guò)采用RB的同系物羅丹明123（Rhodamine123，R123）合成人工抗原，制備針對(duì)RB的多克隆抗體，初步建立了檢測(cè)RB的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）和膠體金免疫層析分析法，兩種方法都具有良好的特異性和靈敏度。利用戊二醛法將R123分別與牛血清白蛋白( bovine serμm albμmin,BSA)和卵清白蛋白( ovalbμmin,OVA)進(jìn)行偶聯(lián)，制備出完全免疫抗原R123-

3、BSA和包被抗原R123-OVA。將免疫原R123-BSA與弗氏佐劑等體積混勻后，采用皮下多點(diǎn)免疫3月齡的新西蘭大耳白兔，制備RB的多克隆抗血清。多次免疫后，經(jīng)測(cè)定兔子產(chǎn)生的抗血清效價(jià)為1：4000，采用硫酸銨鹽析沉淀法純化制得的兔抗血清，得到特異性的RB多克隆抗體。以純化的抗體為基礎(chǔ)，建立了RB的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附法。實(shí)驗(yàn)表明，在0.001ng/ml～10000ng/ml范圍內(nèi)，IC50為3.96ng/ml，IC15達(dá)到了0.23

4、ng/ml，對(duì)羅丹明6G、蘇丹紅和胭脂紅的交叉反應(yīng)率分別為55.93％、8.82%和0.51%，表明此方法具有較高的特異性，并對(duì)方法的精密度、靈敏度等進(jìn)行了評(píng)價(jià)。在樣品的實(shí)際檢測(cè)中，分別對(duì)枸杞、辣椒、花椒進(jìn)行了檢測(cè)，消除了基質(zhì)影響，樣品回收率測(cè)定為80.50%-110.50%，并通過(guò)高壓液相色譜法（HPLC）對(duì)所建立的ELISA方法進(jìn)行了比較和驗(yàn)證，兩種方法均呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2為0.9695。結(jié)果表明，所建立的間接競(jìng)爭(zhēng)E

5、LISA方法各項(xiàng)參數(shù)均能滿足實(shí)際檢測(cè)的需要，適合于食品中RB的免疫快速檢測(cè)。建立了以膠體金標(biāo)記抗體為基礎(chǔ)的RB免疫快速檢測(cè)技術(shù)，以膠體金作為示蹤標(biāo)記物，以硝酸纖維素膜（NC膜）為固相載體，包被R123-OVA作為檢測(cè)帶，包被羊抗兔IgG作為質(zhì)控帶，通過(guò)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，開發(fā)了滲濾式膠體金免疫快速檢測(cè)試紙條，并研制出RB標(biāo)準(zhǔn)品濃度比色卡，RB檢測(cè)范圍為0.01 ng/ml~20 ng/ml，其最低檢出限為0.5 ng/ml。對(duì)實(shí)際樣品的檢測(cè)，