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文檔簡(jiǎn)介
1、第一部分脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷小鼠肺、血和脾常規(guī)樹突狀細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化及與肺損傷關(guān)系研究
目的:探討脂多糖(LPS)誘導(dǎo)急性肺損傷(ALI)小鼠肺、血和脾臟常規(guī)樹突狀細(xì)胞(cDC)動(dòng)態(tài)分布規(guī)律及肺cDC與肺部炎癥損傷關(guān)系。方法C57BL/6小鼠36只,隨機(jī)分為2組:①對(duì)照組(Con):小鼠氣管內(nèi)注射PBS30μl;②ALI組(ALI):氣管內(nèi)注射LPS(2mg/kg)。分別在LPS或PBS注射6h、12h和24h處死。光鏡觀察肺
2、組織病理改變,測(cè)定肺損傷評(píng)分,計(jì)算肺濕重/體重比(LW/BW),酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)肺組織勻漿中白細(xì)胞介素(IL)-6的含量,以反映肺組織炎癥損傷程度。流式細(xì)胞術(shù)(FCM)測(cè)定肺、外周血和脾單細(xì)胞懸液中cDC比例及功能狀態(tài)。結(jié)果ALI組小鼠6h、12h和24h肺LW/BW均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。病理檢測(cè)示ALI組小鼠肺泡間隔增寬、充血、出血及大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等急性肺損傷病理改變。ALI組肺損傷評(píng)分及肺組織IL-6水
3、平均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。FCM檢測(cè)顯示ALI組小鼠早期(6h)肺組織cDC即快速聚集,24h達(dá)到(2.86±0.55)%,均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。與對(duì)照組外周血cDC相比,ALI組6h外周血cDC明顯減少至(0.32±0.10)%,12h恢復(fù)至基線水平,24h顯著升高至(2.20±0.42)%(P<0.05vsCon)。ALI組小鼠脾臟cDC呈一過(guò)性升高,ALI組12h脾臟cDC升高至(1.92±0.25)%(P<
4、0.05vsCon),24h降至基線水平(0.96±0.21)%。在各觀察時(shí)間點(diǎn),ALI組表達(dá)CD80的肺cDC顯著增加(P<0.05vsCon),表達(dá)MHCⅡ的cDC呈升高趨勢(shì),但未達(dá)到顯著差異(P>0.05);ALI組小鼠12h表達(dá)MHCⅡ的外周血cDC增加(P<0.05vsCon);與對(duì)照組相比,ALI組脾臟表達(dá)CD80的cDC顯著增加(P<0.05vsCon),但表達(dá)MHCⅡ無(wú)顯著差異(P>0.05)。相關(guān)分析顯示,在各觀察時(shí)間
5、點(diǎn),ALI組肺組織cDC和表達(dá)CD80的肺cDC與肺組織中IL-6呈顯著正相關(guān),ALI組6h和12h表達(dá)MHCⅡ的肺cDC與肺組織中IL-6呈弱正相關(guān)關(guān)系。結(jié)論ALI早期肺、循環(huán)和脾臟cDC存在不同的動(dòng)態(tài)規(guī)律性變化。肺cDC數(shù)量及功能狀態(tài)與肺炎癥損傷存在密切關(guān)系,肺cDC可能介導(dǎo)ALI病程中免疫炎癥激活過(guò)程。
第二部分急性肺損傷防治新途徑:氯沙坦抑制肺常規(guī)樹突狀細(xì)胞成熟和Th1及Th17型效應(yīng)
目的:探討氯沙
6、坦對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的急性肺損傷(ALI)小鼠肺部炎癥的保護(hù)性效應(yīng)及對(duì)肺常規(guī)樹突狀細(xì)胞(cDC)功能狀態(tài)、輔助性T細(xì)胞(Th)免疫效應(yīng)的影響。方法C57BL/6小鼠隨機(jī)分為:①對(duì)照組(Con):氣管內(nèi)注射與LPS等體積的PBS,氣管內(nèi)注射PBS前30min,予以腹腔內(nèi)注射等體積PBS;②ALI組(ALI):氣管內(nèi)注射LPS2mg/kg復(fù)制ALI模型,氣管內(nèi)注射LPS前30min,予以腹腔內(nèi)注射等體積PBS;③ALI+氯沙坦組(Los
7、):氣管內(nèi)注射LPS2mg/kg前30min,予以腹腔內(nèi)注射氯沙坦15mg/kg。分別在LPS或PBS注射6、24和48h處死。光鏡觀察肺組織病理改變,計(jì)算肺損傷評(píng)分并測(cè)定肺組織肺濕/體重比(LW/BW)。流式細(xì)胞術(shù)(FCM)測(cè)定肺單細(xì)胞懸液中cDC比例及功能狀態(tài)。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定肺組織勻漿中白細(xì)胞介素(IL)-6的含量反映肺組織炎癥損傷程度。實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RealtimeRT-PCR)檢測(cè)肺組織T-be
8、t、GATA-3和RORγtmRNA表達(dá)水平,ELISA測(cè)定肺組織中IFN-γ、IL-4和IL-17的含量反映肺組織Th平衡狀態(tài)。結(jié)果ALI組小鼠24h和48h肺LW/BW明顯高于對(duì)照組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)肺LW/BW(P<0.05)。應(yīng)用氯沙坦(ALI+氯沙坦組)可使肺組織LW/BW較ALI組明顯下降,但仍顯著高于對(duì)照組水平(P<0.05)。LPS誘導(dǎo)ALI肺組織病理檢查見(jiàn)肺泡間隔增寬、肺泡間質(zhì)內(nèi)血管充血、出血及大量炎細(xì)胞滲出,應(yīng)用氯沙坦使AL
9、I小鼠肺組織病理?yè)p傷明顯減輕,肺損傷評(píng)分顯著降低(P<0.05)。ALI組24h和48h肺組織IL-6明顯高于對(duì)照組,應(yīng)用氯沙坦組可使ALI小鼠肺組織IL-6水平明顯下降,但仍明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。ALI組6h肺組織cDC比例顯著升高,表達(dá)CD80的肺cDC明顯增加,ALI+氯沙坦組表達(dá)CD80的肺cDC較ALI組明顯下降,但仍顯著高于對(duì)照組水平;ALI組和氯沙坦組表達(dá)MHCⅡ的cDC無(wú)明顯差異(P>0.05)。LPS刺激可導(dǎo)
10、致小鼠肺T-bet和RORγtmRNA表達(dá)水平明顯升高,且IFN-γ、IL-4和IL-17的含量顯著升高。應(yīng)用氯沙坦可使肺組織中T-bet和RORγtmRNA表達(dá)明顯下降(P<0.05),IFN-γ和IL-17的含量明顯降低,但對(duì)IL-4水平無(wú)明顯影響(P>0.05)。結(jié)論ALI時(shí),肺大量成熟cDC聚集和Th1及Th17型極化免疫反應(yīng)可能參與ALI病程中的免疫失衡。氯沙坦可能通過(guò)抑制肺cDC成熟和Th1及Th17型極化反應(yīng)而對(duì)ALI具抗
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