瘤內(nèi)注射他米巴羅汀PLGA緩釋微球的研究.pdf

1、肝癌是一種常見的惡性腫瘤，臨床常用的治療方法有手術(shù)治療、化學(xué)治療、經(jīng)皮瘤內(nèi)注射治療、放射治療、免疫基因治療、肝動脈栓塞治療等。目前，瘤內(nèi)注射治療成為了肝癌臨床治療的研究熱點(diǎn)，但普通注射劑瘤內(nèi)注射給藥后，大量藥物會經(jīng)過組織間隙滲漏進(jìn)入體循環(huán)，導(dǎo)致腫瘤內(nèi)局部藥物濃度相對較低，治療效果不是很理想。因此，為提高藥物療效，降低副作用，我們通過改變藥物劑型，使其具有緩釋效果，結(jié)合瘤內(nèi)注射給藥，使藥物能長時間作用于腫瘤細(xì)胞，達(dá)到最佳治療目的。

2、　　PLGA微球(MS)作為能夠緩釋藥物的劑型已被廣泛應(yīng)用，PLGA是合成的生物可降解的高分子材料，已經(jīng)被FDA批準(zhǔn)為藥用輔料，在體內(nèi)通過溶蝕降解達(dá)到緩釋藥物的作用，最終降解產(chǎn)物為水和CO2,對人體無毒無害。因此，將抗癌藥他米巴羅汀(Am80)制成PLGA微球注射劑，瘤內(nèi)注射給藥治療肝癌，可提高腫瘤部位的藥物濃度，延長藥物在腫瘤局部的作用時間，減少給藥次數(shù)。
　　本課題以Am80為模型藥物，采用O/W型乳化溶劑揮發(fā)法制備了瘤內(nèi)注射

3、用Am80-PLGA-MS，研究內(nèi)容主要包括Am80-PLGA-MS的制備與理化性質(zhì)的研究、Am80-PLGA-MS體外釋藥性及初步穩(wěn)定性研究、Am80-PLGA-MS體內(nèi)藥物動力學(xué)研究、Am80-PLGA-MS瘤內(nèi)注射治療H22肝癌的藥效學(xué)研究。
　　1.Am80-PLGA-MS的制備與理化性質(zhì)的研究
　　首先，建立Am80-PLGA-MS包封率、載藥量的測定方法并進(jìn)行了方法學(xué)考察。然后，以粒徑和包封率為評價指標(biāo)，對處方及

4、工藝因素進(jìn)行單因素考察，找出影響Am80-PLGA-MS包封率和粒徑的主要因素;采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化處方和工藝;選擇適宜的干燥方法制備注射用的Am80-PLGA-MS;最后，通過重現(xiàn)性試驗(yàn)，驗(yàn)證處方組成的合理性和工藝的穩(wěn)定性;利用DSC法對Am80-PLGA-MS進(jìn)行物相分析，驗(yàn)證Am80-PLGA-MS的形成;同時對Am80-PLGA-MS的外觀形態(tài)、粉體學(xué)性質(zhì)、粒徑與粒度分布、包封率與載藥量等理化性質(zhì)進(jìn)行評價。
　　結(jié)果表明，采用

5、超速離心、UV法測定Am80-PLGA-MS包封率和載藥量，精密度、回收率高、重現(xiàn)性好，在4.4μg/mL～28.6μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;采用乳化-溶劑揮發(fā)法制備Am80-PLGA-MS，該法制備的Am80-PLGA-MS平均粒徑為（7.04±0.03）μm;包封率為(82.23±0.74)％;載藥量為（11.74±0.11）％，表面光滑圓整，復(fù)溶速度快，滿足瘤內(nèi)注射的要求。
　　2.Am80-PLGA-MS體外釋藥性

6、及初步穩(wěn)定性研究
　　首先，建立了Am80-PLGA-MS體外釋放度的測定方法并進(jìn)行了方法學(xué)考察;然后，采用動態(tài)膜透析法，以含有1％的吐溫、0.1％NaN3的pH5.0的PBS為釋放介質(zhì)，以Am80溶液為對照，測定不同時間點(diǎn)Am80-PLGA-MS的體外釋藥情況，繪制釋放曲線，通過數(shù)學(xué)模型對藥物體外釋放曲線進(jìn)行擬合，考察Am80-PLGA-MS的體外釋藥規(guī)律;最后，通過影響因素試驗(yàn)考察Am80-PLGA-MS的初步穩(wěn)定性，目的是為

7、藥品的包裝、貯存、運(yùn)輸提供科學(xué)依據(jù)。
　　結(jié)果表明，所建立的Am80-PLGA-MS含量測定方法，精密度、準(zhǔn)確度高、穩(wěn)定性好，在濃度4.4μg/mL～28.6μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，符合含量測定要求。體外釋放試驗(yàn)結(jié)果表明，Am80原料在釋放介質(zhì)中釋放較快，8h累積釋放百分率達(dá)到(95.65±0.98)％;Am80-PLGA-MS釋放緩慢，第1天(24h)累積釋放百分率為（21.59±0.28）％，第7天累積釋放百分率為（64

8、.34±0.36）％，14天時累積釋放百分率達(dá)到（96.17±1.49）％，緩釋效果較好。影響因素試驗(yàn)結(jié)果表明，Am80-PLGA-MS制劑在40℃條件下不穩(wěn)定，易結(jié)塊，但藥物含量變化不明顯;在92.5％高濕度環(huán)境下放置，微球含量下降明顯，而在濕度為75％的環(huán)境下微球的外觀形態(tài)以及藥物含量均無明顯變化;在光照條件下微球微球外觀及含量均無明顯變化，表明微球應(yīng)該在低溫干燥的環(huán)境中貯存。
　　3.Am80-PLGA-MS體內(nèi)藥物動力學(xué)研

9、究
　　首先，在昆明小鼠腋下接種對數(shù)生長期的H22腫瘤細(xì)胞，建立荷瘤小鼠H22腫瘤模型;然后，以荷瘤小鼠作為動物模型，以Am80增溶溶液為對照，分別瘤內(nèi)注射Am80增溶溶液和Am80-PLGA-MS，通過測定不同時間點(diǎn)小鼠腫瘤部位的藥物濃度和血漿中的藥物濃度，比較兩種制劑在腫瘤局部的藥物量和滲漏進(jìn)入體循環(huán)中的藥物量。通過腫瘤部位藥物濃度與時間關(guān)系求得藥物動力學(xué)參數(shù)，以此評價Am80-PLGA-MS的緩釋長效作用，探討Am80-PL

10、GA-MS局部用藥的優(yōu)勢，為瘤內(nèi)注射局部給藥的研究提供新的思路。
　　結(jié)果表明，瘤內(nèi)注射給藥后，在腫瘤組織內(nèi)，微球組在各個時間點(diǎn)的藥物濃度明顯高于溶液組。藥物動力學(xué)參數(shù)結(jié)果顯示，與溶液組相比，微球組t1/2β和MRT明顯延長，分別為溶液組的15.43倍和8.62;微球組AUC為溶液組的9.98倍，CL為溶液組0.09倍，微球組藥生物利用度明顯增高。在血漿中，溶液組的血藥濃度水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于微球組，藥物溶液組的Cmax為7.588μg/

11、mL是微球組的2.31倍。結(jié)果表明，Am80被包覆于微球后，能夠減少Am80從腫瘤向體內(nèi)血液循環(huán)的滲漏，降低藥物全身吸收導(dǎo)致的毒副作用。
　　4.Am80-PLGA-MS瘤內(nèi)注射治療H22肝癌的藥效學(xué)研究
　　首先，通過在昆明小鼠腋下接種對數(shù)生長期的H22腫瘤細(xì)胞建立小鼠H22腫瘤模型，以荷瘤小鼠為動物模型，以pH5.0的PBS為對照，分別瘤內(nèi)注射Am80增溶溶液和Am80-PLGA-MS，通過觀察不同時間點(diǎn)的瘤體體積，計(jì)算

12、腫瘤倍增時間(DT)，抑瘤率(TGI)，腫瘤特定生長率(SGR)評價各組藥物對腫瘤生長的抑制作用;通過觀察不同時間點(diǎn)的動物體重，評價藥物的毒性;對不同時間點(diǎn)腫瘤組織HE染色，在顯微鏡下觀察病理學(xué)特征，根據(jù)炎癥、細(xì)胞的壞死情況以及腫瘤細(xì)胞的修復(fù)情況評價藥物的療效，以驗(yàn)證Am80-PLGA-MS在體內(nèi)的藥物活性以及緩釋性。
　　結(jié)果表明，微球組、溶液組均能不同程度的抑制腫瘤的生長，微球組的DT是溶液組的1.34倍，TGI是溶液組的2.

13、63倍，SGR是溶液組的0.72倍，微球組對腫瘤的抑制作用明顯強(qiáng)于藥物溶液組。小鼠的體重變化不大，說明藥物對小鼠的毒性較小。病理學(xué)結(jié)果表明，在相同劑量下，Am80-PLGA-MS組治療效果更好。雖然在治療初期，Am80溶液組療效較Am80-PLGA-MS組好，但由于藥物的半衰期短以及藥物分子量小易通過組織擴(kuò)散，使得Am80溶液組在腫瘤部位維持有效藥物濃度時間短，而處于靜止期的腫瘤細(xì)胞又重新增殖，此時Am80溶液組的藥物濃度對腫瘤細(xì)胞已無