基于主客體作用的細(xì)胞內(nèi)核酸鏈光控釋放的研究.pdf

1、基因治療在生物醫(yī)學(xué)和生物有機(jī)學(xué)領(lǐng)域有著廣闊的前景，基因沉默也有著重要的生物學(xué)意義。基因治療領(lǐng)域的關(guān)鍵問(wèn)題就是如何將外源核酸成功引入細(xì)胞以及在細(xì)胞內(nèi)如何可控、高效的釋放。目前，利用納米材料作為負(fù)載體，運(yùn)載外源核酸進(jìn)入細(xì)胞已經(jīng)獲得了很大的成功。本文主要研究了通過(guò)納米顆粒負(fù)載外源核酸進(jìn)入細(xì)胞后，外源核酸鏈如何在細(xì)胞內(nèi)可控、高效釋放的方法。
　　 本文首先研究了基于環(huán)糊精和偶氮苯的主客體相互作用實(shí)現(xiàn)體外光調(diào)控細(xì)胞基因沉默。將巰基化的環(huán)糊

2、精修飾在金納米顆粒表面，在目標(biāo)核酸鏈上標(biāo)記偶氮苯分子。在可見(jiàn)光照射下偶氮苯為反式構(gòu)型，可以進(jìn)入環(huán)糊精分子空腔，形成負(fù)載核酸鏈的金納米顆粒。利用金納米顆粒的生物相容性將核酸鏈負(fù)載進(jìn)入細(xì)胞。通過(guò)紫外光的照射使偶氮苯的構(gòu)型發(fā)生變化，脫離環(huán)糊精分子的空腔，實(shí)現(xiàn)目標(biāo)鏈的可控釋放，達(dá)到抑制綠色熒光蛋白表達(dá)的目的。
　　 其次，分析研究了基于二茂鐵的協(xié)同競(jìng)爭(zhēng)作用實(shí)現(xiàn)體外光調(diào)控目標(biāo)核酸鏈在細(xì)胞中的快速釋放。二茂鐵分子與環(huán)糊精的結(jié)合常數(shù)比偶氮苯與

3、環(huán)糊精的結(jié)合常數(shù)高一個(gè)數(shù)量級(jí)，因此在有二茂鐵分子存在的條件下，二茂鐵與環(huán)糊精的強(qiáng)結(jié)合力促進(jìn)偶氮苯分子從環(huán)糊精中的釋放。當(dāng)光照與二茂鐵同時(shí)存在時(shí)，外源核酸會(huì)在進(jìn)入細(xì)胞后快速的釋放，縮短光照時(shí)間。
　　 最后，研究了基于核酸三鏈結(jié)構(gòu)的銀離子表面增強(qiáng)拉曼檢測(cè)。核酸單鏈能很好的穩(wěn)定金納米顆粒，核酸三鏈對(duì)金納米顆粒的穩(wěn)定性不強(qiáng)。銀離子能與兩個(gè)胞嘧啶作用形成配合物。溶液中沒(méi)有銀離子時(shí)，單鏈和雙鏈能很好的穩(wěn)定金納米顆粒。當(dāng)加入銀離子后，單鏈通