多壁碳納米管及其所含鐵對(duì)PC12細(xì)胞的影響.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模禾接懚啾谔技{米管及其所含鐵對(duì)PC12細(xì)胞分化前后形態(tài)的影響。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　運(yùn)用ICP-MS檢測(cè)多壁碳納米管內(nèi)Fe++的精確含量；實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)照組、Low-Fe++MWCNTs組、High-Fe++MWCNTs組，運(yùn)用CCK-8試劑盒檢測(cè)不同濃度（5、10、30、60μg/ml）多碳納米管孵育不同時(shí)間（24、48、72h）的細(xì)胞活力變化；通過dead/live染色觀察碳納米管孵育細(xì)胞48h的細(xì)胞狀態(tài)，并應(yīng)用免疫

2、熒光檢測(cè)F-actin的構(gòu)象變化。為觀察多壁碳納米管對(duì)細(xì)胞分化的影響，將多壁碳納米管與細(xì)孵育48h，再用50ng/mlNGF連續(xù)誘導(dǎo)細(xì)胞分化7天，對(duì)每個(gè)細(xì)胞的軸突數(shù)量和細(xì)胞分化率進(jìn)行計(jì)數(shù)；應(yīng)用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞特異性骨架蛋白β-tubulin的構(gòu)象及分布變化，并檢測(cè)TH的表達(dá)。為初步探討多碳納米管對(duì)PC12細(xì)胞形態(tài)的影響機(jī)制，將多壁碳納米管與細(xì)胞孵育48h，再運(yùn)用TEM觀察多壁碳納米管在細(xì)胞內(nèi)的定位以及亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化；運(yùn)用激光共聚焦

3、顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS的生成。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　ICP-MS檢測(cè)發(fā)現(xiàn)High-Fe++MWCNTs含鐵量為12％，Low-Fe++MWCNTs含鐵量為4.2%；CCK-8法檢測(cè)顯示不同濃度多壁碳納米管（5、10、30、60μg/ml）孵育細(xì)胞24h或48h時(shí)細(xì)胞活力無變化，當(dāng)多壁碳納米管與細(xì)胞孵育72h，High-Fe++MWCNTs在濃度大于10μg/ml時(shí)對(duì)細(xì)胞有毒性作用，Low-Fe++MWCNT在濃度大于30μg

4、/ml時(shí)對(duì)細(xì)胞有毒性作用；免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn)30μg/ml的High-Fe++MWCNTs孵育細(xì)胞2天時(shí)導(dǎo)致F-actin在細(xì)胞邊緣表達(dá)減弱或凝結(jié)成結(jié)節(jié)樣，Low-Fe++MWCNT致F-actin張力減弱。
　　將多壁碳納米管與細(xì)孵育48h，再用50ng/mlNGF連續(xù)誘導(dǎo)細(xì)胞分化7天，發(fā)現(xiàn)30μg/ml High-Fe++ MWCNTs和Low-Fe++MWCNTs對(duì)細(xì)胞軸突數(shù)量及分化率無影響，但是都能抑制TH的表達(dá)；High-

5、Fe++MWCNTs抑制β-tubulinⅢ的表達(dá)并致使F-actin和β-tubulinⅢ在突起內(nèi)的重合減弱。
　　在初步探討碳納米管與細(xì)胞作用機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，High-Fe++ MWCNTs和Low-Fe++MWCNTs都能進(jìn)入細(xì)胞并以折疊或成團(tuán)狀存在于大小空泡內(nèi)，High-Fe++MWCNTs組細(xì)胞傾向凋亡，細(xì)胞內(nèi)ROS生成不明顯。
　　結(jié)論：
　　1．High-Fe++MWCNTs與細(xì)胞孵育72h、當(dāng)濃度大于10μ