解淀粉芽孢桿菌X-278生物片劑的研制及田間試驗.pdf

1、內(nèi)生解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)X-278分離自辛集市棉田健康棉株，室內(nèi)和田間藥效試驗證明，該菌對棉花黃萎病有很好的防治效果并且具有一定的促生作用。內(nèi)生解淀粉芽孢桿菌X-278有很好的定殖能力，在根內(nèi)最高定殖量達2.3×105cfu/g，在莖內(nèi)最高定殖量達1.6×105cfu/g，接種35d后仍有很好的定殖能力。內(nèi)生解淀粉芽孢桿菌X-278室內(nèi)對棉花黃萎病的防效高達59.49％，顯著提高籽棉產(chǎn)量

2、達53.46kg/畝。通過對X-278菌株脂肽抗生素的薄層層析分析，證明該菌中含有閉合肽鍵類的物質(zhì)，其中有的組分與相對遷移率Rf和標樣surfactin非常相近;X-278菌株脂肽抗生素的高效液相色譜(HPLC)研究表明，X-278菌株脂肽抗生素中含有保留時間與surfactin相似的成分。棉花是我國很多地區(qū)的主要農(nóng)作物，關系到當?shù)氐慕?jīng)濟發(fā)展。棉花黃萎病對棉花危害較大且發(fā)生較多的病害，能極大的影響棉花的產(chǎn)量和質(zhì)量。生物防治是目前防治土傳

3、病害最有效環(huán)保的方法，因此利用拮抗微生物防治棉花黃萎病是比較有發(fā)展前景的防治方法。我國在微生物農(nóng)藥劑型方面的研究遠差于發(fā)達國家，為了研究生物農(nóng)藥新劑型，提高生物農(nóng)藥的儲存期限，延長其使用壽命，保持其在生產(chǎn)實踐中的防治效果，本研究以對棉花黃萎病具有很好防治效果的解淀粉芽孢桿菌X-278為研究對象，并在前期研究的基礎上，對X-278搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件進行優(yōu)化，研制了一種在根部使用的微生物片劑，檢測該片劑的指標及田間應用效果。獲得的主要

4、研究成果如下:
　　1、以內(nèi)生解淀粉芽孢桿菌X-278為研究對象，采用單因素和雙指標正交試驗，通過比較抑菌圈及OD600nm，對其液體發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件進行了優(yōu)化。得到的內(nèi)生解淀粉芽孢桿菌X-278最適培養(yǎng)基的各組分最佳配比為:葡萄糖1.5％、花生餅2％、硫酸銨0.5％、碳酸鈣0.1％、硫酸鎂0.5％、氯化鈉0.5％;最佳發(fā)酵培養(yǎng)條件為初始PH7，培養(yǎng)溫度34℃，轉(zhuǎn)速180r/min，種齡為24h，500mL的三角瓶中裝液量為1

5、50mL，發(fā)酵培養(yǎng)基的接種量為2％，發(fā)酵時間為72h。優(yōu)化后得到的發(fā)酵液中活菌數(shù)達到1.5×1010cfu/mL，對棉花黃萎病的抑菌圈為33.4mm。
　　2、通過對不同載體、營養(yǎng)成分（碳源和氮源）及粘合劑的篩選，研制出了一種便于儲存和運輸、并可在棉花根部施用的解淀粉芽孢桿菌X-278（以下簡稱X-278）片劑，并且檢測該生物片劑的各項指標，該生物片劑的主要成分為:以硅藻土為載體，以質(zhì)量分數(shù)為15％的葡萄糖為碳源，以質(zhì)量分數(shù)為30

6、％的花生餅為氮源，20％的淀粉漿為粘合劑，通過干法壓片得到了外觀完整、光潔，色澤均勻且具有一定穩(wěn)定性的X-278片劑，其含水量（質(zhì)量分數(shù)）為0.5％，菌含量為7.4×107 cfu/g，未檢測到有其他雜菌存在;-20～37℃保存200d，均能保持很好的穩(wěn)定性，其中在28℃下保存時穩(wěn)定性最好。片劑的各指標都符合標準。研制的微生物片劑具有成型性好、工藝簡單、省時省力、易于貯存、運輸安全等優(yōu)點。
　　3、采用利福平標記法測定了X-278

7、在棉花根、莖及土壤中的定殖能力。采用隨機區(qū)組設計進行田間試驗，研究了解淀粉芽孢桿菌X-278微生物片劑、發(fā)酵液、可濕性粉劑對棉花黃萎病的田間防治效果，結(jié)果表明在棉花根部施用X-278片劑40d后，X-278的最高定殖量在棉花根內(nèi)為1.56×103cfu/g，在莖中為3.6×103cfu/g，在根際土壤中達3.8×106cfu/g，持效期達60d;田間試驗結(jié)果表明，X-278片劑對棉花黃萎病的防治效果均優(yōu)于其發(fā)酵液及枯草芽孢桿菌可濕性粉劑