鵝皮膠原蛋白的提取及功能性研究.pdf

1、浙東白鵝是我國(guó)的地方優(yōu)勢(shì)品種，在浙江地區(qū)有著廣泛的養(yǎng)殖。過(guò)去生鵝皮常用來(lái)制作鵝裘皮，但隨著制革行業(yè)對(duì)于鵝皮的需求量減少，越來(lái)越多的鵝皮被直接丟棄，既造成了生物資源的極大浪費(fèi)，又造成環(huán)境污染。
　　膠原蛋白的提取方法主要有酸法，堿法和酶法等，而膠原肽一般通過(guò)水解膠原蛋白或明膠的方法獲得的。研究表明，膠原肽具有諸多生理活性--抗氧化功能、降血壓作用、提高機(jī)體對(duì)礦物元素的吸收能力、增強(qiáng)免疫力、抗菌作用等。
　　本文以浙東白鵝鵝皮為

2、研究對(duì)象，研究鵝皮膠原活性肽提取的最佳工藝，再分別探討鵝皮膠原活性肽的體內(nèi)和體外生理功能。主要研究成果如下：
　　一、響應(yīng)面優(yōu)化酸提鵝皮膠原蛋白的工藝：使用乙醚去除鵝皮脂肪；選用乳酸為浸提溶液，控制pH1.9、料液比1:50(g/mL)、浸提時(shí)間為60 h，鵝皮膠原蛋白提取率最高，且純度最好，分別為30.12％和92.01%。所得鵝皮膠原蛋白經(jīng)分析鑒定為具有完整三螺旋結(jié)構(gòu)的Ⅰ型膠原蛋白。
　　二、選取風(fēng)味蛋白酶和木瓜蛋白酶雙

3、酶復(fù)合水解鵝皮膠原蛋白，以水解率，DPPH·清除率，苦味值為指標(biāo)，四因素三水平正交優(yōu)化后得到最佳工藝。在木瓜蛋白酶:風(fēng)味蛋白酶=1:1的比例下，加酶量4000 U·g-1，溫度50℃，pH6.0，水解5 h后，所得鵝皮膠原蛋白肽的水解度和DPPH·清除率最高，分別為28.3%和89.2%，且沒(méi)有苦味。經(jīng)Sephadex G-75分離純化后獲得DPPH·清除率最高的P4組分，經(jīng)分析鵝皮膠原多肽P4組分感官評(píng)價(jià)、溶解能力和乳化能力均較好。<

4、br>　　三、建立D-半乳糖致衰小鼠模型，觀察鵝皮膠原多肽P4組分對(duì)小鼠體內(nèi)抗氧化性的影響。小鼠的安全性試驗(yàn)表明膠原多肽對(duì)小鼠生長(zhǎng)無(wú)抑制性和致敏性。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)行小鼠分組試驗(yàn)，將小鼠分為正常對(duì)照組、D-半乳糖致衰模型組、低劑量鵝皮膠原蛋白肽灌胃組、高劑量鵝皮膠原蛋白肽灌胃組和VE對(duì)照組。試驗(yàn)表明灌胃高低濃度的鵝皮膠原蛋白肽后的致衰小鼠血清中的總膽固醇(TC)含量、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量、動(dòng)脈硬化指數(shù)(LDL-C/HDL-

5、C)等指標(biāo)都顯著降低，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)含量和抗動(dòng)脈粥樣硬化因子(HDL-C/TC)水平顯著增加；試驗(yàn)還表明，灌胃鵝皮膠原多肽 P4組分后，致衰小鼠血清和肝臟中的MAD含量降低，SOD、TAC、GSH-Px及CAT等酶酶活顯著提高。此外，對(duì)小鼠脾臟指數(shù)及胸腺指數(shù)的測(cè)定發(fā)現(xiàn)鵝皮膠原多肽 P4組分對(duì)小鼠免疫能力有一定提高作用。
　　四、體外培養(yǎng)小鼠 B16黑素瘤細(xì)胞，研究鵝皮膠原多肽 P4對(duì)小鼠 B16黑色素瘤細(xì)胞黑素中

6、合成的影響。當(dāng)鵝皮膠原多肽P4濃度達(dá)到100μg/ml時(shí)，黑素降低33.11%（P<0.01），酪氨酸酶活性降低27.76%（P<0.01）；使用含有鵝皮膠原多肽 P4的完全培養(yǎng)液培養(yǎng) B16黑素瘤細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞中 GSH水平升高，GSSH水平降低，有效地提高了細(xì)胞內(nèi)還原能力；隨著鵝皮膠原多肽 P4濃度的升高，cAMP含量逐漸下降，在濃度為50μg/ml時(shí)，細(xì)胞中 cAMP含量下降40.75%（P<0.01），抑制了B16黑素細(xì)胞中黑素的