鵝皮膠原蛋白抗氧化肽及膠原蛋白復(fù)合膜應(yīng)用的研究.pdf

1、我國(guó)是世界上養(yǎng)鵝大國(guó)，其年出欄量約占世界的80％，并且每年鵝養(yǎng)殖量總體呈現(xiàn)上漲的趨勢(shì)。浙東白鵝作為地方優(yōu)勢(shì)品種，在浙江地區(qū)養(yǎng)殖范圍較廣。鵝皮中含有豐富的膠原蛋白，膠原蛋白經(jīng)水解后可形成具有多種生物活性的膠原蛋白肽，而抗氧化性是膠原蛋白肽重要的功能活性之一。本文以新鮮鵝皮為原料，利用胃蛋白酶酶解法提取鵝皮膠原蛋白，通過(guò)可控酶解技術(shù)采用分步酶解法制備抗氧化性膠原蛋白肽，利用體外化學(xué)模型和細(xì)胞模型綜合評(píng)價(jià)膠原蛋白肽的抗氧化活性，最后將提取的膠

2、原蛋白制備膠原蛋白-殼聚糖可食性復(fù)合膜，用于肉品的保鮮。
　　首先，利用已有的提取工藝提取膠原蛋白，確定了采用木瓜+風(fēng)味蛋白酶復(fù)合酶和堿性蛋白酶分步水解法制備鵝皮膠原蛋白肽生產(chǎn)工藝條件。本試驗(yàn)采用單因素方差分析優(yōu)化二次酶解的水解用酶；在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)曲面法確定最佳 pH、酶解溫度和酶解時(shí)間。結(jié)果表明，在膠原蛋白的二次酶解中，以堿性蛋白酶酶解產(chǎn)物抗氧化活性較好，堿性蛋白酶的最優(yōu)酶解條件為pH8.96、酶解溫度為49.2

3、7℃、酶解時(shí)間為5.68 h，此時(shí)所得多肽還原力達(dá)到13.56×10-2，較優(yōu)化前提高了3.51%。
　　其次，采用葡聚糖G-50凝膠過(guò)濾層析在220 nm處對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行分離、純化，收集得到 A、B、和 C三個(gè)分離組分，濃縮干燥后對(duì)各個(gè)組分進(jìn)行體外抗氧化性測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果顯示膠原蛋白肽C組分對(duì)DPPH自由基、O2-自由基和OH自由基清除能力、Fe3+還原能力均高于A、B組分。
　　再次，以小腸上皮細(xì)胞(IEC-6細(xì)胞)為研究

4、對(duì)象，建立H2O2誘導(dǎo)IEC-6細(xì)胞氧化損傷模型，探究鵝皮膠原蛋白肽C組分對(duì)H2O2誘導(dǎo)的IEC-6細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)機(jī)制。試驗(yàn)結(jié)果表明：膠原蛋白肽濃度范圍在50-200 mg/L時(shí)，對(duì)IEC-6細(xì)胞無(wú)明顯細(xì)胞毒性作用；使用含有鵝皮膠原蛋白肽C組分的完全培養(yǎng)液培養(yǎng) IEC-6氧化損傷細(xì)胞時(shí)，與膠原蛋白肽濃度為0 mg/L試驗(yàn)組相比，細(xì)胞活力增強(qiáng)(p<0.05)，丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量顯著下降(p<0.05)

5、，乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)釋放率減少(p<0.05)；IEC-6細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、過(guò)氧化氫酶(catalase，CAT)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)抗氧化酶活性增加，此研究顯示膠原蛋白肽能夠?qū)2O2誘導(dǎo)的IEC-6細(xì)胞氧化損傷起到保護(hù)作用。
　　最后，以膠原蛋白和殼聚糖為原料，制備

6、了膠原蛋白-殼聚糖可食性復(fù)合膜，用于鴨肉的保鮮。本試驗(yàn)顯示殼聚糖含量少于40%時(shí)，隨殼聚糖含量的增加，復(fù)合膜水蒸氣透過(guò)系數(shù)明顯降低；當(dāng)殼聚糖含量超過(guò)40%時(shí)，水蒸氣透過(guò)系數(shù)趨于穩(wěn)定；復(fù)合膜的拉伸強(qiáng)度隨殼聚糖含量增加，呈先增加后減少的趨勢(shì)，當(dāng)膠原蛋白與殼聚糖比為4:6時(shí)復(fù)合膜的拉伸強(qiáng)度為36.05 MPa；復(fù)合膜的斷裂伸長(zhǎng)率隨殼聚糖含量增多而增大；對(duì)新鮮鴨肉進(jìn)行膠原蛋白-殼聚糖復(fù)合膜涂膜處理，降低了鴨肉貯藏過(guò)程中 TVB-N含量，提高了肉