鹿骨膠原蛋白的制備及抗氧化活性研究.pdf

1、本文以馬鹿鹿腿骨為原料，制備出鹿骨膠原蛋白，對膠原蛋白的相關特性進行研究，并對其抗氧化活性進行研究。
　　（1）以新鮮馬鹿鹿腿骨為原料，采用雙酶酶解法制備鹿骨粉；通過單因素試驗并正交優(yōu)化確定出鹿骨雙酶法酶解的最佳工藝條件，最佳工藝條件為：堿性蛋白酶在pH9.0、溫度50℃的條件下水解時間為3h，再在pH8.0、溫度37℃條件下，加入胰蛋白酶水解2h，此時的水解度為12.72％，分別是堿性蛋白酶和胰蛋白酶最大水解度的1.84倍和1.

2、39倍。
　　（2）采用酸法加酶法的提取工藝制備鹿骨膠原蛋白，用0.5mol/L的冰醋酸及6000U/g的胃蛋白酶在4℃條件下進行水解提取，在單因素試驗的結果基礎上，采用響應面優(yōu)化試驗優(yōu)化鹿骨膠原蛋白的提取的最佳工藝參數，優(yōu)化出的最佳工藝參數為：加酶量6000U/g，提取時間48h，液料比15:1，此時膠原蛋白的特征氨基酸羥脯氨酸的得率為40.86%。經紫外全波長掃描分析，鹿骨膠原蛋白在234nm處有最強吸收峰，符合膠原蛋白特征吸

3、收峰在230nm處的特性；鹿骨膠原蛋白的紅外譜圖顯示出其含有4個酰胺段，顯示出蛋白質的特征吸收，且鹿骨膠原蛋白的具有較高的氫鍵結合能力；鹿骨膠原蛋白形成凝膠的能力要強于牛骨膠原蛋白和豬骨膠原蛋白；DSC掃描分析，鹿骨膠原蛋白的熱轉變溫度為119.3℃；經SDS-PAGE電泳表明，鹿骨中含有分子量為95KDa的膠原蛋白，并有一個分子量大于130KDa的膠原蛋白，牛骨和豬骨的分子量范圍與鹿骨大致相同；通過掃描電鏡分析，鹿骨膠原蛋白呈紡錘型，

4、與哺乳動物的類似；鹿骨膠原蛋白的氨基酸組成成分分析則表明其為典型的膠原蛋白氨基酸組成。
　?。?）采用分子量5KDa的透析袋及Sephadex G-25對膠原蛋白進行純化，得到分子量大于5KDa、1-5KDa、小于1KDa三個分子量范圍的膠原蛋白；三種不同分子量的樣品都顯示出較強的·OH和DPPH·自由基清除能力，明顯高于陽性對照；當膠原蛋白質量濃度呈上升趨勢時，不同分子量的膠原蛋白樣品的自由基清除能力逐漸增加；且分子量越小，自由