牦牛骨膠原多肽螯合鈣的制備研究.pdf

1、本研究以牦牛骨粉為原料制備牦牛骨膠原多肽螯合鈣。以多肽得率為主要指標(biāo)，篩選出酶解牦牛骨效果最好的酶進(jìn)行酶解，通過(guò)單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化該酶的酶解條件得到酶解法制備的牦牛骨膠原多肽;從酶解后的牦牛骨粉中提取可溶性骨鈣，通過(guò)單因素和響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化提取條件;在此基礎(chǔ)上對(duì)自制多肽、骨鈣進(jìn)行螯合，利用單因素和響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化螯合條件;再用紫外掃描分析、紅外光譜分析、x射線(xiàn)衍射分析、電鏡掃描對(duì)制備的多肽、多肽螯合鈣進(jìn)行結(jié)構(gòu)對(duì)比分析，對(duì)牦牛骨膠原多

2、肽螯合鈣的消化特性和穩(wěn)定性進(jìn)行研究。結(jié)果如下。
　　篩選出堿性蛋白酶為最優(yōu)酶，最佳酶解條件為底物濃度3.5％，酶底比4000U/g，pH7.0，酶解時(shí)間4h，酶解溫度50℃，此時(shí)多肽得率為22.06％。
　　選取鹽酸作為提取骨鈣的最優(yōu)用酸，最佳提取條件為溫度67℃，時(shí)間75min，鹽酸濃度1mol/L，鹽酸用量18mL，此條件下提取出的鈣含量為112.18mg/g。
　　確定骨鈣作為螯合的鈣源，將骨鈣與超濾后的各分子量

3、段的肽進(jìn)行螯合，發(fā)現(xiàn)2kD到5kD的肽的螯合率最高。獲得最佳螯合條件為肽鈣質(zhì)量比2∶1，pH8.0，多肽濃度25mg/mL，螯合時(shí)間90min，螯合溫度45℃，此時(shí)的螯合率為76.04％。
　　紫外掃描分析發(fā)現(xiàn)膠原多肽與鈣螯合后生成了新的物質(zhì);紅外光譜分析發(fā)現(xiàn)螯合鈣的特征基團(tuán)吸收峰出現(xiàn)了紅移、藍(lán)移、消失和新增，膠原多肽與鈣發(fā)生了螯合反應(yīng)，推測(cè)其位點(diǎn)是膠原多肽側(cè)鏈氨基、羧基和內(nèi)部肽鍵;x衍射分析發(fā)現(xiàn)多肽經(jīng)過(guò)螯合后產(chǎn)生了新的吸收峰，進(jìn)