雙酶階段式水解制備豬皮膠原多肽螯合鈣工藝研究.pdf

1、分類號：盟密級：公玨單位代碼：10086學號：—201320—70094雙酶階段式水解制備豬皮膠原多肽螯合鈣工藝研究Studyonthepreparationofpigskincollagenpolypeptidechelatedcalciumbystagetypedoubleenzymehydrolysis學位申請人：敖冉指導教師：張志勝教授學科專業(yè)：食品科學學位類別：工學碩士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學答辯日期：二。一六年五月二十九日摘要

2、豬皮中富含膠原蛋白，是優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)資源。利用新鮮豬皮為原料制備膠原多肽具有環(huán)保、健康、廢物高效利用等諸多優(yōu)點。但目前實際生產(chǎn)中常利用較為簡單的酸法或堿法水解，水解產(chǎn)物質(zhì)量不高且易造成二次污染。利用酶法水解制備膠原多肽產(chǎn)物純度高且條件溫和，在添加外源鈣后精確控制螯合條件能夠達到較高的螯合率，制得優(yōu)質(zhì)的膠原多肽螯合鈣產(chǎn)品。主要實驗結(jié)果如下：1、研究并確定了酶法水解豬皮制備膠原多肽的主要工藝參數(shù)，以氨基態(tài)氮生成量為指標分析了不同酶制劑種類、不

3、同酶制劑組合對酶解效果的影響。分別確定了中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶三種單一酶以及三種酶制劑兩兩協(xié)同水解的工藝參數(shù)：單一酶水解時堿性蛋白酶的效果顯著優(yōu)于中性蛋白酶和木瓜蛋白酶，且在溫度50℃、pH值為8、酶解時間4h、加酶量3000U／g條件下水解效果最好。雙酶協(xié)同水解的最適宜組合為中性蛋白酶、堿性蛋白酶協(xié)同，水解條件為酶解溫度50℃、加酶量3500U／g、pH值為6、酶解時間4h。2、基于雙酶協(xié)同水解工藝對酶解過程中酶制劑的添加

4、順序以及酶制劑添加比例進行篩選，最終確定雙酶階段式水解工藝為：添加順序為先加堿性蛋白酶，中性蛋白酶半程加入，即酶解時間為3h，酶解開始后90min后加入中性蛋白酶，酶解溫度50℃、酶制劑添加比例中性蛋白酶：堿性蛋白酶=1：2、pH值為7、加酶量2500U／g。階段式水解在酶制劑加入量為2500U／g時已經(jīng)可以達到較高的酶解效率。利用高效液相色譜法對產(chǎn)物分析可知雙酶階段式水解氨基酸組分的種類和數(shù)量顯著優(yōu)于其它水解方式。由SDS—PAGE圖

5、譜可知雙酶階段式水解制得的膠原多肽分子量集中，非目標雜肽較少，產(chǎn)物分子量主要集中在3000道爾頓到30000道爾頓之問。3、以實驗室自制的豬皮膠原多肽為原料，添加外源鈣制備膠原多肽螫合鈣，以螯合率為指標，研究肽鈣添加比例、溫度、pH值、時間四因素對豬皮膠原多肽螯合鈣螯合效果的影響。通過設計單因素和響應面試驗對螯合效果進行優(yōu)化，得到優(yōu)化的螯合工藝的主要參數(shù)：肽鈣比例271：1、溫度587l℃、pn值715、螯合時間30min，此條件下螯合