膠原蛋白抗氧化與延緩皮膚衰老作用研究.pdf

1、膠原蛋白是一類結構獨特的蛋白質，在延緩皮膚衰老中的應用廣泛，歷史悠久，形式多樣。但目前，人們對其研究仍主要集中在分離提取以及理化特性方面，而關于其抗氧化活性、延緩皮膚功效的的報道十分有限，結論有所差異。本文以尼羅羅非魚膠原蛋白為原料，研究了膠原蛋白的抗氧化活性、延緩皮膚衰老功效及其生物利用率和利用形式，為膠原蛋白在延緩皮膚衰老中的應用提供一定的實驗證據和理論依據。主要研究內容及結果如下:
　　(1)利用體外模擬胃腸道消化模型，研究

2、了膠原蛋白的消化動態(tài)和抗氧化活性。膠原蛋白從冒進入小腸后，其水解度從1.15％增加到了16.74％;疏水性卻從21.46％降低到了2.06％; DPPH自由基的清除率從18.22％增加到了31.79％;亞油酸自氧化抑制率在40 min時達到了34.63％，而后趨于穩(wěn)定。然后利用超濾技術，將膠原蛋白的消化產物分離得到了三個組分，其中平均分子量最小(436.80Da)的組分得率(86.70％)和抗氧化活性最高。該組分依次經過Toyopear

3、lSP-650M、Sephadex G10、Eclipse XDB C18柱純化得到了一種高抗氧化活性肽，經UPLC-ESI-MS鑒定為Gly-Pro-Met(303.38 Da)，其IC50值為25.64μg/mL。
　　(2)利用D-半乳糖致亞急性衰老小鼠模型，研究了膠原蛋白灌胃延緩皮膚衰老的功效。膠原蛋白(2000 mg/kg.d)灌胃8周后，小鼠（胸腺、脾臟、肝臟）臟器指數，皮膚和血清抗氧化酶(SOD、GSH-Px)活性均

4、顯著增加(p＜0.05);皮膚膠原蛋白含量顯著提高，MDA含量顯著降低(p＜0.05);皮膚組織形態(tài)、膠原纖維、彈性纖維的形態(tài)和數量明顯改善。
　　(3)通過SD大鼠灌胃試驗，利用藥動學和代謝組學技術研究了膠原蛋白的生物利用率和利用形式。膠原蛋白(4000 mg/kg)灌胃后，血漿中Hyp含量快速增加，在2.33 h才達到峰值（59.47μg/mL），在24 h的保留量為14.65％，相對和絕對生物利用率分別為48.58％、65.

5、57％;血漿中所有游離和結合氨基酸均明顯增加，且血漿中各種氨基酸的增加量與膠原蛋白中的含量呈正比;最后利用UPLC-ESI-MS技術，從血漿中鑒定出了16種主要的膠原多肽，分別是:Glu-Asp、Glu-Met、 Glu-Asn、Tyr-Met、Asp-Glu、Gly-Ser-Pro、Pro-Gly-Hyp、Ser-Ser、Ala-Ala-His、Pro-Hyp、Ala-Asn、Ser-Gly-Met、Glu-Trp-Leu、Phe-G