野葛內(nèi)生菌抗氧化及抗衰老作用的研究.pdf

1、研究已經(jīng)證實(shí)氧化特別是氧自由基與高等動(dòng)物許多疾病的發(fā)生、發(fā)展以及衰老密切相關(guān)，天然抗氧化劑在醫(yī)藥衛(wèi)生、食品、化妝品以及飼料等領(lǐng)域有巨大的應(yīng)用前景。植物內(nèi)生菌是新型天然生物活性物質(zhì)研究開(kāi)發(fā)的重要資源。本論文開(kāi)展野葛內(nèi)生菌抗氧化及抗衰老作用的相關(guān)研究，旨在為野葛內(nèi)生菌的研究利用和新型抗氧化及抗衰老天然活性物質(zhì)的研究開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：
　　 1.野葛內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物體外抗氧化活性的研究。采用DPPH（1，1-二苯基苦

2、基苯肼）自由基清除法、ABTS（2，2-連氮-雙（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸））自由基清除法、羥基自由基清除體系，超氧陰離子自由基清除體系、還原能力測(cè)試體系研究四株野葛內(nèi)生細(xì)菌（編號(hào)分別為Nc1、Nd1、Ne2、Na2）的體外抗氧化活性。結(jié)果表明，所測(cè)試的菌株代謝產(chǎn)物均顯示出不同程度的體外抗氧化活性。在10mg/mL的濃度下，菌株Nc1、Nd1、Ne2、Na2代謝產(chǎn)物粗提物對(duì)DPPH自由基清除率分別為74％、57％、82％、69％；對(duì)A

3、BTS自由基清除率分別為80％、71％、88％、68％；對(duì)羥基自由基清除率分別為40％、95％、67％、74％；對(duì)超氧陰離子自由基清除率分別為62％、23％、54％、45％；還原能力大小依次為Nc1>Ne2>Na2>Nd1。不同濃度樣品對(duì)自由基清除效果的研究結(jié)果表明，所有樣品對(duì)自由基的清除率均呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系。Nc1、Nd1、Ne2、Na2，對(duì)超氧陰離子自由基的50％清除率（IC50）依次為8.31 mg/mL、23.8mg/mL、9

4、.13 mg/mL、11.1 mg/mL，對(duì)羥基自由基的50％清除率（IC50）依次為12.5 mg/mL、5.7 mg/mL、7.9 mg/mL、6.9 mg/mL。
　　 2.野葛內(nèi)生菌Ne2代謝產(chǎn)物粗提樣品對(duì)D-半乳糖致衰老加速小鼠的抗衰老作用。采用D-半乳糖致亞急性衰老法建立小鼠衰老模型，以Vc為陽(yáng)性對(duì)照組，通過(guò)對(duì)小鼠體征、行為學(xué)觀察、臟器系數(shù)和對(duì)防御性抗氧化酶（SOD、GSH-PX）、脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物（MDA）等指標(biāo)的檢

5、測(cè)，測(cè)定野葛內(nèi)生菌Ne2代謝產(chǎn)物樣品低、中、高劑量組對(duì)D-半乳糖致亞急性衰老小鼠抗衰老能力的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明，D-半乳糖能明顯加速小鼠衰老各項(xiàng)體征，包括記憶和學(xué)習(xí)能力顯著降低，腦組織SOD、GSH-PX含量顯著降低，血清MDA含量顯著增高等。與模型組比較，野葛內(nèi)生菌Ne2代謝產(chǎn)物樣品高劑量組小鼠的腦組織SOD含量提高12.5％（P<0.05）、血清GSH-PX含量提高52.3％（P<0.01）、血清MDA含量降低40.9％（P<0.0

6、1）、學(xué)習(xí)記憶能力明顯提高（P<0.01）、胸腺系數(shù)提高15.5％（P<0.01）、脾系數(shù)提高13.9％（P<0.05）、心臟系數(shù)提高19.2％（P<0.01）和腦系數(shù)提高21.5％（P<0.01）。對(duì)小鼠海馬組織超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察，結(jié)果表明高劑量組D-半乳糖致衰老小鼠的細(xì)胞膜和細(xì)胞核結(jié)構(gòu)損傷程度明顯減輕。提示高劑量的野葛內(nèi)生菌Ne2代謝產(chǎn)物粗提樣品對(duì)細(xì)胞老化的細(xì)胞核和細(xì)胞膜具有良好的改善作用。
　　 3.野葛內(nèi)生菌Ne2抗氧化活

7、性成分AE1初步分離純化和抗氧化研究。通過(guò)硅膠柱層析，高效液相等活性成分分離技術(shù)，對(duì)菌株Ne2的抗氧化活性組分進(jìn)行分離純化，得到一個(gè)活性組分（編號(hào)為AE1），紫外光譜掃描和高效液相色譜檢測(cè)結(jié)果顯示組分AE1為單一組分。對(duì)AE1進(jìn)行體外抗氧化定量研究，結(jié)果顯示，AE1表現(xiàn)出很強(qiáng)的自由基清除能力，其對(duì)DPPH自由基、ABTS自由基、羥基自由基、和超氧陰離子自由基的50％清除率（IC50）分別為0.2683mg/mL、0.4897mg/mL、