香菇Sd-08菌株多糖及其降解產(chǎn)物的提取、結(jié)構(gòu)及抗氧化抗衰老活性研究.pdf

1、香菇（Lentinus edodes）又稱為花菇，香菌，香蕈，冬菇，香菰，屬真菌門（Eumycophyta），側(cè)耳科（Pleurotaceae），香菇屬（Lentinus），是世界第二大食用菌，也是我國特產(chǎn)之一。因其營養(yǎng)豐富，味道鮮美，香氣沁脾，在民間素有“山珍”之稱。香菇多糖的生物學(xué)活性主要包括抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、降血糖、降血脂、抗疲勞和提高機(jī)體免疫力等。
　　鋅是人體內(nèi)的必需微量元素之一，作為多種酶的重要組分，在人體的生長

2、發(fā)育、認(rèn)知記憶以及保持細(xì)胞的完整性和蛋白質(zhì)核酸的生物合成等過程中發(fā)揮及其重要的作用。我國的膳食結(jié)構(gòu)屬于低鋅水平，而且鋅在人體內(nèi)不能合成，必需從外界攝入。
　　本課題通過Plackett-Burman(PB)和響應(yīng)面(response surface methodology，RSM)等試驗(yàn)對(duì)香菇胞外多糖（extracellular polysaccharides，EPS）、菌絲體多糖(myceliapolysaccharides，M

3、PS)和菌絲體鋅多糖(myceliazinc polysaccharides，MZPS)進(jìn)行了研究，對(duì)EPS和MZPS的提取條件進(jìn)行了優(yōu)化，測(cè)定了三種多糖的單糖組成，化學(xué)結(jié)構(gòu)及分子量，同時(shí)進(jìn)行了體外抗氧化和抗衰老活性試驗(yàn)，并對(duì)三種多糖及EPS和MZPS的酶解(EEPS、EMZPS)、酸解產(chǎn)物(SEPS、SMZPS)進(jìn)行了組分分離，并測(cè)定了各多糖組分的體外抗氧化活性。
　　(1) EPS和MZPS的提取條件優(yōu)化
　　通過PB試

4、驗(yàn)，分別確定了對(duì)香菇多糖得率影響最顯著的三個(gè)因素，RSM試驗(yàn)結(jié)果表明，在各自最優(yōu)提取條件下，EPS的理論得率為2.74g/L，MZPS為1.48％;實(shí)際得率分別為EPS2.75g/L，MZPS1.48％。
　　(2)香菇多糖的組分分離
　　經(jīng)過DEAE-纖維素分離，EPS得到組分EPS-1和EPS-2，MPS得到組分MPS-1和MPS-2，MZPS得到組分MZPS-1和MZPS-2，EEPS得到組分EE-1和EE-2，SEP

5、S得到SE-1，EMZPS得到組分EP-1和EP-2，SMZPS得到SP-1。
　　(3)香菇多糖及其組分的體外抗氧化活性
　　在濃度為1000mg/L時(shí)，EPS、EEPS和SEPS的還原力分別為0.44±0.03、1.13±0.01和1.19±0.05，對(duì)羥基自由基的清除率分別為93.64±1.25％、99.87±1.12％和73.47±3.64％，對(duì)DPPH的清除率分別為15.93±0.13％，97.21±0.57％和6

6、0.73±2.01％;在100mg/L時(shí)，EPS-1、EPS-2、EE-1、EE-2和SE-1的還原力分別為0.25±0.02、0.77±0.01、0.22±0.03、0.26±0.01和0.19±0.01，對(duì)羥基自由基的清除率分別為46.08±0.02％、39.70±0.01％、10.13±0.03％、89.01±0.01％和19.28±0.01％，對(duì)DPPH的清除率分別為12.02±0.02％、8.28±0.01％、16.21±0.

7、03％、17.87±0.01％和67.28±0.01％。表明EPS經(jīng)過酶解和酸解后抗氧化能力都有所提高，相同濃度范圍經(jīng)DEAE纖維素分離后某一個(gè)組分的抗氧化能力明顯高于粗糖。
　　在濃度為1000mg/L時(shí)，MPS、MZPS、EMZPS和SMZPS的還原力分別為0.14±0.03、0.77±0.001、0.52±0.05和0.31±0.03，對(duì)羥基自由基的清除率分別為58.99±1.03％、66.20±1.34％、78.58±2.

8、33％和92.10±2.57％，對(duì)DPPH的清除率分別為13.77±0.37％，77.33±0.28％，52.79±0.58％和31.08±0.87％;在100mg/L時(shí)，MZPS-1、MZPS-2、EP-1、EP-2和SP-1的還原力分別為0.03±0.02、0.04±0.01、0.49±0.03、0.50±0.01和0.38±0.01，對(duì)羥基自由基的清除率分別為1.34±0.02％、10.63±0.01％、22.04±0.03％、1

9、9.22±0.01％和25.14±0.01％，對(duì)DPPH的清除率分別為4.98±0.02％、9.97±0.01％、13.39±0.03％、22.03±0.01％和13.90±0.01％。表明酶解和酸解作用提高了MZPS的抗氧化能力，相同濃度范圍經(jīng)DEAE纖維素分離后某一個(gè)組分的抗氧化能力明顯高于粗多糖。
　　(4)香菇多糖的抗衰老活性
　　結(jié)果表明，EPS、MPS和MZPS均能明顯提高小鼠組織的中T-AOC水平，GSH-Px

10、和SOD活性，降低組織中MDA的含量。與模型組相比，多糖試驗(yàn)組結(jié)果均達(dá)到極顯著水平，表明EPS、MPS和MZPS都具有較強(qiáng)的抗衰老活性。與MPS相比，MZPS具有更強(qiáng)的活性。
　　(5)香菇多糖組分的單糖組成及摩爾比
　　氣相色譜法測(cè)定了EPS、MPS和MZPS單糖組成及摩爾比，結(jié)果顯示EPS的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖和葡萄糖，其摩爾比為2.7∶1∶2.9∶1.8;MPS的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖和甘露糖，其摩爾

11、比為1.7∶1∶3.0; MZPS的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖和葡萄糖，其摩爾比為7.2∶2.3∶1∶8.4。
　　(6)香菇多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)測(cè)定
　　通過紅外光譜法對(duì)EPS和MZPS在4000-400cm-1區(qū)段進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示，EPS和MZPS均為D-吡喃型糖。
　　(7)香菇多糖的分子量測(cè)定
　　EPS的數(shù)均分子量Mn為5.32×102，重均分子量Mw為3.58×104，多分散系數(shù)Mw/Mn為67.