蛹蟲(chóng)草誘變菌株多糖的提取及其抗氧化活性分析.pdf

1、蛹蟲(chóng)草[Cordyceps militaris(L.EXFr)Link]，又名北冬蟲(chóng)夏草、蛹草、北蟲(chóng)草、蛹草菌等，分類學(xué)上屬于子囊菌亞門（Ascomycotina）、核菌綱（Pyrenomycetes）、球殼菌目（Sphaeriales）、麥角菌科（Claviciptiaceae）、蟲(chóng)草屬（Cordyceps）。富含多種生物活性物質(zhì)，蛹蟲(chóng)草多糖在抗氧化、增強(qiáng)免疫力等方面有重要作用，是一種名貴的食藥用真菌。
　　 紫外線孢子誘變技

2、術(shù)是一種行之有效的育種方法，至今仍廣泛應(yīng)用。真菌多糖在國(guó)際上被稱為“生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物”，由于其獨(dú)特的生理活性，目前正成為國(guó)內(nèi)外眾多學(xué)科領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。
　　 蛹蟲(chóng)草多糖不僅存在于子實(shí)體中，經(jīng)發(fā)酵獲得的菌絲體和發(fā)酵液也是多糖的主要來(lái)源之一。經(jīng)液態(tài)深層發(fā)酵培養(yǎng)獲得的蛹蟲(chóng)草菌絲體和發(fā)酵液，其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和有效成分與子實(shí)體相當(dāng)，并且液態(tài)深層發(fā)酵法具有生產(chǎn)周期短、生長(zhǎng)條件易控制、產(chǎn)量高等優(yōu)點(diǎn)，相對(duì)傳統(tǒng)方法而言更易實(shí)現(xiàn)大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化、周年化生產(chǎn)

3、。
　　 蛹蟲(chóng)草多糖的藥用價(jià)值及其應(yīng)用已為世界各國(guó)重視。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)的研究重點(diǎn)已經(jīng)由蛹蟲(chóng)草的栽培及菌種的馴化轉(zhuǎn)移到蛹蟲(chóng)草多糖的提取及活性功能等方面。
　　 本課題采用蛹蟲(chóng)草孢子懸液紫外誘變的方法選育出了高產(chǎn)多糖且遺傳穩(wěn)定的誘變菌株SU5-8，初步確定了最適紫外線照射時(shí)間為120s。
　　 利用Plackett-burman（PB）實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面法（response surface methodology，RSM）優(yōu)

4、化了SU5-8胞內(nèi)多糖（intracellular polysaccharide，IPS）和胞外多糖（exopolysaccharide，EPS）的分離提取條件。胞內(nèi)多糖提取最佳條件是超聲波處理次數(shù)60、超聲波功率545W、乙醇倍數(shù)3.3、提取溫度80℃，在此優(yōu)化條件下，多糖得率達(dá)9.23％；胞外多糖優(yōu)化條件是pH7.4、乙醇濃度95％、乙醇倍數(shù)3.5，在此優(yōu)化條件下，多糖得率達(dá)2.91μg/mL。
　　 以二苯基苦基苯肼自由基

5、（DPPH）、超氧陰離子自由基（O2-·）、羥基自由基（·OH)和總還原力為指標(biāo)，對(duì)蛹蟲(chóng)草多糖體外抗氧化能力進(jìn)行了初步探討。結(jié)果表明，胞內(nèi)多糖和胞外多糖對(duì)上述三種自由基都有很好的清除作用，清除率均在50％以上。在還原力方面，IPS和EPS有明顯的差別，相差在50％以上。
　　 通過(guò)測(cè)定小鼠心、肝、脾、腎組織和全血的脂質(zhì)過(guò)氧化物含量、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶及超氧化物歧化酶的活性，觀察了多糖對(duì)機(jī)體各組織及全血抗氧化能力的影響。結(jié)果表明，

6、EPS和IPS均能提高小鼠組織及全血超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidsade，GSH-Px）活性，并能降低丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量，提高了機(jī)體抗活性氧損傷的能力，為防止或減輕脂質(zhì)過(guò)氧化損傷提供了試驗(yàn)依據(jù)。綜合來(lái)看，IPS提高SOD和GSH-Px活性與降低MDA含量的能力要高于EPS；未除蛋白的比去除蛋白的要高。