從蛹蟲(chóng)草栽培殘?jiān)刑崛》蛛x蟲(chóng)草素及其抑制腫瘤活性的研究.pdf

1、蟲(chóng)草素即3’-脫氧腺苷，是蛹蟲(chóng)草的活性成分之一。近50多年的研究發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)草素有抑制腫瘤、抗真菌和增強(qiáng)免疫力的作用，已引起各國(guó)科學(xué)研究的高度重視。本研究課題以蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基殘基為原料，系統(tǒng)深入研究了蟲(chóng)草素檢測(cè)方法、提取純化工藝、純度鑒定及蟲(chóng)草素的抗腫瘤活性研究等。
　　 建立了蟲(chóng)草素高效液相色譜法，色譜標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y=64055x-26.599，線性相關(guān)系數(shù)r=0.9999，線性范圍為：0.01-0.1 mg/mL，精密度及穩(wěn)定性

2、實(shí)驗(yàn)的RSD均小于1％。本法簡(jiǎn)單快速，蟲(chóng)草素能夠達(dá)到很好的分離效果。
　　 探索從培養(yǎng)基殘基中提取蟲(chóng)草素的技術(shù)，優(yōu)化了蟲(chóng)草素水提醇沉的工藝。得出最佳水提醇沉工藝條件：40℃提取4次，料液比為1:20，每次提取2 h。提取液濃縮到廢料量的2倍，添加3倍量乙醇，醇沉?xí)r間為9h。
　　 蟲(chóng)草素水提液經(jīng)過(guò)乙醇除雜后，雜質(zhì)含量仍然很高，需要先對(duì)蟲(chóng)草素提取液進(jìn)行初步分離。通過(guò)對(duì)6種陽(yáng)離子交換樹(shù)脂靜態(tài)吸附蟲(chóng)草素的特性進(jìn)行研究，最終選擇

3、JK006樹(shù)脂用于蟲(chóng)草素的粗純化。對(duì)陽(yáng)離子樹(shù)脂JK006進(jìn)行熱力學(xué)特征研究，研究結(jié)果表明，在溫度298K～308 K和蟲(chóng)草素質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，吸附過(guò)程符合Freundlich吸附等溫方程。熱力學(xué)參數(shù)焓變△H>0，自由能變△G<0，JK006樹(shù)脂對(duì)蟲(chóng)草素的吸附是吸熱過(guò)程，反應(yīng)是自發(fā)進(jìn)行的。
　　 影響陽(yáng)離子樹(shù)脂JK006動(dòng)態(tài)吸附解吸的因素有流速、吸附液濃度、解吸液濃度等，吸附柱最佳工作條件：流速3 BV/h，吸附液濃度1.69 mg

4、/mL。解吸液為0.25 mol/L的氨水，解吸流速2 BV/h.。
　　 經(jīng)過(guò)陽(yáng)離子樹(shù)脂JK006的初步純化后，采用717陰離子樹(shù)脂進(jìn)一步純化，得到純度為96.4％蟲(chóng)草素晶體。用TLC法、HPLC法、紫外光譜、紅外光譜等對(duì)獲得的蟲(chóng)草素進(jìn)行定性定量鑒定，確定其與標(biāo)準(zhǔn)品為同一種物質(zhì)。
　　 以白血病細(xì)胞K562為陽(yáng)性對(duì)照，研究了不同濃度的自制蟲(chóng)草素對(duì)小鼠肝癌H22細(xì)胞增殖的抑制作用。結(jié)果表明，蟲(chóng)草素對(duì)K562細(xì)胞和H22細(xì)