蛹蟲草中蟲草素和腺苷的提取分離及其對糖尿病小鼠腎臟氧化應(yīng)激的影響.pdf

1、糖尿病腎病(Diabetes nephropathy，DN)是糖尿病主要的并發(fā)癥之一，也是糖尿病病人壽命縮短的主要原因之一。糖尿病腎病由綜合因素引起，但一般認(rèn)為氧化應(yīng)激是造成DN發(fā)生與發(fā)展的直接原因。因此，如何更加有效的控制氧化應(yīng)激反應(yīng)對于延緩和改善DN的發(fā)生及發(fā)展過程具有重要的現(xiàn)實意義。
　　近年來，臨床與實驗研究發(fā)現(xiàn)，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化系統(tǒng)與改善免疫功能可延緩糖尿病腎病進(jìn)程。蟲草素及腺苷是蛹蟲草中的兩種主要活性成分，具有調(diào)節(jié)免疫、

2、抗氧化及抗衰老等重要生理功效，具有潛在的對糖尿病腎臟氧化應(yīng)激的治療效果。為了能夠大量、高效的得到蟲草素、腺苷混合物，并研究其對糖尿病腎病的治療效果，本研究首先采用酶法輔助提取的方法，結(jié)合大孔樹脂吸附層析，獲得了一定純度的蟲草素、腺苷混合純化物。以昆明種小鼠為研究對象，共56只，隨機(jī)分為正常對照組、糖尿病對照組、鹽酸貝那普利片藥物對照組、蟲草素和腺苷提取物低、高劑量組，蟲草素和腺苷純化物低、高劑量組共7組，每組8只小鼠，使用鏈脲佐菌素(S

3、TZ)獲得糖尿病模型小鼠。造模成功后分別灌胃給藥6周，測定腎臟皮質(zhì)中丙二醛(MDA)、NO含量，血清中BUN、Cr和UA的含量和腎臟組織中的抗氧化酶活性。主要研究結(jié)果如下:
　　1)比較了水熱回流法、醇熱回流法及酶法輔助提取蛹蟲草中蟲草素、腺苷的提取效果。與水熱回流法相比，酶法輔助提取蟲草素的提取率提高32.5％，腺苷提取率提高了24.9％。與醇熱回流法相比，酶法輔助提取蟲草素的提取率提高了31.6％，腺昔提取率提高了33.1％。

4、酶法輔助提取效果最佳，其工藝條件為:料液比1∶24，提取溫度為42℃，提取時間為150min，酶添加量為1.81％。在此條件下蟲草素的提取率為86.45％，腺苷提取率為70.06％。
　　2)通過比較四種大孔樹脂對蟲草素及腺苷的吸附解吸能力，確定了NKA-Ⅱ大孔樹脂作為蟲草素及腺苷的分離純化材料。并得到了蟲草素和腺苷的同步分離純化最佳工藝條件:樣品液pH8.0，洗脫劑為70％的乙醇水溶液，上樣量體積為50mL，洗脫劑流速3BV/h

5、，洗脫劑用量為150mL的純化工藝分離純化蛹蟲草中蟲草素和腺苷，在此條件下，蟲草素回收率可達(dá)到92.0％，純度32.5％，較純化之前純度提高了10.89倍;腺苷回收率可達(dá)到82.5％，純度29.9％，較純化之前純度提高了9.76倍。
　　3)研究了蟲草素和腺苷的提取物及純化物對糖尿病小鼠腎臟氧化應(yīng)激的影響。研究結(jié)果表明，與正常組小鼠相比，糖尿病模型組小鼠血糖明顯升高、體重下降、腎臟指數(shù)上升(P＜0.01)，并且各治療組并沒有阻止糖

6、尿病小鼠血糖的升高與體重的下降。但相對于糖尿病模型組小鼠來說，治療組小鼠的腎臟指數(shù)有所下降，但無統(tǒng)計學(xué)差異。蟲草素和腺苷純化物高劑量組可降低高血糖引起的腎臟肥大，顯著提高糖尿病小鼠腎臟的T-SOD及CAT酶的活性(P＜0.01)，降低BUN、Cr、UA、MDA及NO的含量(P＜0.01)。說明蟲草素、腺苷純化物高劑量組可以調(diào)節(jié)腎臟抗氧化酶的活力，改善腎小球率過濾，減少對腎臟的氧化損傷，對糖尿病小鼠腎臟具有一定的保護(hù)作用。
　　本研