蛹蟲草生長營養(yǎng)特性及胞外酶活性的研究.pdf

1、被譽(yù)為―東方圣草的蛹蟲草是一種具有藥用及滋補(bǔ)功效的珍貴食藥用真菌。多方研究表明，蛹蟲草所含的蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖、超氧化岐化酶（SOD）、維生素和礦質(zhì)元素等多種活性成分都遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過著名的珍貴中藥----冬蟲夏草，臨床上常將蛹蟲草作為冬蟲夏草的替代品入藥，因此，蛹蟲草的開發(fā)前景十分廣闊。本研究以6個(gè)蛹蟲草菌株為對(duì)象，分別進(jìn)行了分子鑒定、菌絲體培養(yǎng)特性研究，篩選出了優(yōu)勢(shì)菌種；采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化得到了蛹蟲草液體菌種最適培養(yǎng)基配方；比較了各

2、菌株栽培過程中生長差異和子實(shí)體活性成分，同時(shí)研究了各菌株不同生長階段的胞外酶活性變化，從而為蛹蟲草優(yōu)良菌種的選育、培養(yǎng)條件的優(yōu)化及人工規(guī)?；耘嗵峁├碚摵图夹g(shù)依據(jù)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴在6個(gè)蛹蟲草菌種種質(zhì)篩選試驗(yàn)中，首先進(jìn)行拮抗試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)這6個(gè)菌株兩兩之間、同一菌株之間均存在拮抗現(xiàn)象；通過rDNA的ITS序列鑒定及進(jìn)化樹分析，鑒定這6個(gè)菌株均為蛹蟲草菌，且親緣關(guān)系較近；最適培養(yǎng)條件下，CM3的菌絲生長速度最快，CM8生長速

3、度最慢，但CM5的生長勢(shì)最好；菌絲轉(zhuǎn)色培養(yǎng)表明CM4、CM5轉(zhuǎn)色快、顏色深，CM8不轉(zhuǎn)色；液體培養(yǎng)下，脫氫酶活性高的是CM5，最低的是CM8；CM5液體培養(yǎng)菌絲生物量最高，菌絲球大小均勻，密度大。在液體培養(yǎng)出菇試驗(yàn)中，CM5、CM4轉(zhuǎn)色后顏色橘黃，子座多而長，出草整齊，CM8不轉(zhuǎn)色，不出草。綜合分析得出，這6個(gè)供試菌株，CM5、CM4為優(yōu)良菌株，CM1次之，CM3與CM2較差，而CM8為不能出草的退化菌株。⑵篩選出優(yōu)勢(shì)種CM5為研究對(duì)象

4、，以菌絲生物量為指標(biāo)，優(yōu)化液體菌種培養(yǎng)基。結(jié)果表明：最適碳源為蔗糖，最適氮源為酵母粉，最適培養(yǎng)基配方為蔗糖3%、酵母粉1%、KH2PO40.2%和MgSO40.2%。⑶這6個(gè)菌株固體栽培研究和子實(shí)體活性成分檢測(cè)表明，CM5、CM4菌絲生長快，潔白、濃密，長勢(shì)良好，轉(zhuǎn)色快，顏色橘黃，原基分化早，形成子座多，產(chǎn)生的子實(shí)體粗細(xì)均勻，密度大，子實(shí)體頂端呈乳頭狀突起的子囊殼，出草整齊，無污染，生長周期短，商品性狀良好，產(chǎn)量高；CM8不能轉(zhuǎn)色，不出

5、草。5個(gè)出草菌株的子實(shí)體中蟲草素含量最高的是CM4，最低的為CM2，蟲草酸和蟲草多糖含量最高的均為CM5，最低的均為CM1，此外，在這5個(gè)菌株的子實(shí)體中均檢測(cè)到了多種其他的活性成分。⑷這6個(gè)供試菌株的三種酶活性最高的是淀粉酶，其次是蛋白酶，最低的為纖維素酶，轉(zhuǎn)色能力好的菌株的纖維素酶和淀粉酶活性在轉(zhuǎn)色期達(dá)到峰值，纖維素酶活與子座的形成正相關(guān)；而淀粉酶活性高則會(huì)抑制子座的正常分化，并與子實(shí)體的生長正相關(guān)；在子座形成期，蛋白酶活性高的菌株子