基于rDNA ITS序列分析的石斛屬種內(nèi)及種間鑒別.pdf

1、分類號R931.5學校代號10572UDC610密級學號091100090廣州中醫(yī)藥大學GuangzhouUniversityofChineseMedicineGuangzhouUniversityofChineseMedicine碩士學位論文基于rDNA基于rDNAITSITS序列分析的石斛屬序列分析的石斛屬種內(nèi)及種間鑒別種內(nèi)及種間鑒別學位申請人李海霞李海霞指導教師姓名黃海波副教授黃海波副教授專業(yè)名稱生藥學生藥學申請學位類型科學學位科

2、學學位論文提交日期2012年4月2012年4月摘要石斛類藥材應用歷史悠久，具有滋陰清熱、潤肺止咳、生津益胃等功效。在《神農(nóng)本草經(jīng)》當中被列為“上品”藥材，具有較高的經(jīng)濟價值。多年來由于對石斛資源的需求量巨大，許多地方均開展了對石斛進行大規(guī)模人工栽培的研究。鐵皮石斛（DendrobiumofficinaleKimuretMigo）具有增強免疫力、降低血糖、抗衰老、抗腫瘤等活性，可用于胃腸道、白內(nèi)障、關節(jié)炎和慢性咽炎等疾病的治療，在癌癥放化

3、療患者的康復治療中應用廣泛。在石斛新品種選育及資源開發(fā)研究中，對物種身份進行準確的鑒定極為重要。由于商品石斛種類繁多、基源復雜藥材在加工炮制過程中，形態(tài)、性狀會發(fā)生變化導致傳統(tǒng)的以形態(tài)學為主的鑒定方法在實際應用中顯得捉襟見肘?；诤怂嵝蛄蟹治龅腄NA條形碼技術的出現(xiàn)，為快速準確地鑒定樣品物種的身份帶來了希望。位于核基因具有多拷貝的內(nèi)轉錄間隔區(qū)（InternaltranscribedspacerITS）已廣泛用于種內(nèi)和種間親緣關系分析。I

4、TS區(qū)依次包括ITS1、5.8S、ITS2，位于其兩端的18S和26S因較為保守，通常以之為模板設計引物，對ITS進行擴增。目的：通過對野生鐵皮石斛樣品的4段候選序列（葉綠體基因psbAtrnH、matK、rbcL；核ITS序列）進行篩選，用篩選出來的序列結合GenBank數(shù)據(jù)庫中所有已知的代表性的同源序列進行多重序列比對和親緣關系分析，同時通過尋找特異性的堿基變異位點，從種內(nèi)和種間2個層面，探討利用DNA序列分析方法推測鐵皮石斛產(chǎn)地可

5、行性及石斛屬植物分組鑒別的可行性。為鐵皮石斛優(yōu)良品種選育和引種馴化提供理論依據(jù)。方法：一、DNA測序方法：將所有植物材料用無菌水沖洗干凈，晾干剪碎后用硅膠干燥，各稱取0.05g，經(jīng)液氮研磨后，用天根DP305離心柱型植物基因組DNA提取試劑盒提取總基因組DNA。利用引物對上述樣品進行PCR擴增。取3LPCR擴增產(chǎn)物在1%瓊脂糖凝膠電泳上檢測，經(jīng)Wizard試劑盒純化后送是中國農(nóng)業(yè)科學院作物科學研究所開放實驗室進行雙向測序。二、數(shù)據(jù)分析方