安徽懷遠(yuǎn)地區(qū)大豆疫霉的鑒定及rDNA-ITS序列分析.pdf

1、大豆疫病由大豆疫霉（Phytophthora sojae）引起，是一種世界性大豆病害，也是我國(guó)對(duì)外檢疫性植物病害。本學(xué)位論文對(duì)安徽省懷遠(yuǎn)地區(qū)大豆疫霉進(jìn)行分離，形態(tài)學(xué)和致病性鑒定以及致病型和核糖體DNA的ITS序列鑒定，取得的主要研究成果如下：
　　1.采集懷遠(yuǎn)地區(qū)大豆田的土樣34份，葉碟誘捕法后分離到7株疫霉菌株，檢出頻率為20.59％。從上述分離獲得的7株大豆疫霉菌中選取3個(gè)具有代表性菌株（HY11、HY15、HY17）進(jìn)行了形

2、態(tài)學(xué)鑒定，結(jié)果表明，HY11、HY15、HY17在利馬豆瓊脂培養(yǎng)基（LBA）上生長(zhǎng)緩慢，菌絲致密、無(wú)隔，形成菌絲膨大體，近直角分支，分支稍溢縮，菌絲直徑在2.5-6.3μm。孢子囊頂生，倒梨形，不脫落，內(nèi)層出，長(zhǎng)寬比1.64（>1..6）。3個(gè)菌株都為同宗配合的，藏卵器球形，直徑在25.0-41.3μm，雄器多側(cè)生，偶見圍生。查閱疫霉分類檢索表，可以將上述分離物鑒定為大豆疫霉（P. sojae）。致病性測(cè)定后，所有菌株對(duì)合豐35大豆品種

3、具有致病性，發(fā)病癥狀與田間大豆植株相同，參照柯赫氏法則可鑒定其為大豆疫霉。
　　2.采用下胚軸接種法，將分離到的菌株接種在15個(gè)含有不同抗病基因的大豆植株上，結(jié)果表明，7個(gè)菌株分別屬于7個(gè)不同的致病型：1d,2,3a,3b,3c,4,5,6,7，1d,3a,3b,3c,4,5,6,7，1d,3a,3b,3c,4,5,6，4,5,6,7，2,3c,4,5,6,7，3c,4,6,7和4,6,7。其中能克服9個(gè)抗病基因的菌株有1個(gè)，表明

4、在懷遠(yuǎn)地區(qū)存在大豆疫病的較強(qiáng)毒性菌株；能克服Rps3c、Rps4、Rps5、Rps6和Rps7的菌株出現(xiàn)頻率超過(guò)70%，說(shuō)明它們?cè)谟N方面的價(jià)值不大，能克服Rps1d、Rps3a、和Rps3b的菌株出現(xiàn)頻率均超過(guò)了40%，能克服Rps2的菌株數(shù)出現(xiàn)頻率28.57%。
　　3.采用ITS序列分析法對(duì)懷遠(yuǎn)地區(qū)大豆疫霉進(jìn)行了分子鑒定：利用卵菌核糖體基因內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS）通用引物，對(duì)3個(gè)代表性菌株（HY11、HY15、HY17）進(jìn)行P

5、CR擴(kuò)增，結(jié)果表明：3個(gè)供試菌株都可以得到1條大小約為300 bp的特異性擴(kuò)增產(chǎn)物；再用大豆疫霉特異性引物對(duì)上述3個(gè)供試菌株進(jìn)行PCR擴(kuò)增然后進(jìn)行序列測(cè)定；然后利用UPGMA法對(duì)供試菌株和 GenBank中已登錄的P. sojae、P. medicaginis、P. trifolii、P. palmivora、P. capsici、P. inpestans和P.cactorum等7個(gè)形態(tài)學(xué)種14個(gè)菌株的ITS堿基序列進(jìn)行聚類分析。結(jié)果顯

6、示，供試的3個(gè)疫霉菌株的 ITS序列皆一樣長(zhǎng)，而且核苷酸的堿基序列完全相同；且與GenBank中登錄的大豆疫霉（P. sojae）菌株AY256844、AB688408、GU993914和GU259351的 ITS序列的同源性高達(dá)100%。聚類結(jié)果表明，供試菌株HY11、HY15、HY17及 GenBank中登錄的大豆疫霉（P. sojae）AY256844、AY590274、AB688408、GU993914和GU259351成一組，