不同產(chǎn)地黑茶的化學(xué)指紋圖譜研究.pdf

1、黑茶屬于后發(fā)酵茶，是我國(guó)特有的茶類，主產(chǎn)地為湖南、四川、云南、廣西、湖北和陜西等省份。過(guò)去對(duì)黑茶質(zhì)量的評(píng)價(jià)主要是測(cè)定某些主要指標(biāo)成分的含量并結(jié)合感官審評(píng);近年來(lái)，黑茶產(chǎn)品的產(chǎn)量和貿(mào)易量不斷增加，而不同產(chǎn)地黑茶的質(zhì)量參差不齊，將化學(xué)指紋圖譜技術(shù)應(yīng)用于對(duì)黑茶的研究能較好地體現(xiàn)黑茶的復(fù)雜性和整體性，能為對(duì)我國(guó)不同產(chǎn)地黑茶的鑒別和質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考。因此，本研究以我國(guó)6個(gè)黑茶主產(chǎn)地的108個(gè)黑茶樣品為研究對(duì)象，采用色譜和光譜分析方法，優(yōu)化了樣品的

2、提取、制備條件和色譜、光譜條件，建立了HPLC-DAD-ELSD同時(shí)測(cè)定茶葉中11種組分的分析方法，并分別初步建立了我國(guó)6個(gè)產(chǎn)地黑茶的HPLC-DAD、HPLC-ELSD和FTIR指紋圖譜共有模式。主要研究結(jié)果如下:
　　1.采用HPLC-DAD-ELSD聯(lián)用的檢測(cè)技術(shù)，分別初步建立了6個(gè)黑茶主產(chǎn)地及我國(guó)黑茶的HPLC-DAD和HPLC-ELSD指紋圖譜共有模式，其中針對(duì)黑茶中氨基酸類等組分紫外響應(yīng)弱的特點(diǎn)而研究建立的不同產(chǎn)地黑茶

3、的HPLC-ELSD指紋圖譜可作為對(duì)HPLC-DAD指紋圖譜的必要補(bǔ)充。研究了色譜分離條件和樣品提取條件的主要影響因素，確定色譜條件為:采用線性梯度洗脫，甲醇和0.1％的三氟乙酸水溶液為流動(dòng)相，柱溫為30℃，DAD檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，流動(dòng)相的流速為1.0mL/min，ELSD的霧化氣體流速為2.8L/min，漂移管溫度為110℃;確定用于HPLC指紋圖譜分析的黑茶樣品提取條件為:用超純水作為提取溶劑，在90℃水浴下浸提15min，料液

4、比為1∶70。方法學(xué)考察表明精密度、重現(xiàn)性良好，黑茶樣品提取液在24h內(nèi)穩(wěn)定。根據(jù)平均相對(duì)保留時(shí)間、共有峰、平均相對(duì)峰面積和同源峰等對(duì)黑茶的HPLC指紋圖譜進(jìn)行了分析，其中在我國(guó)黑茶的HPLC-DAD指紋圖譜共有模式中共確定13個(gè)共有峰，在我國(guó)黑茶的HPLC-ELSD指紋圖譜共有模式中共確定10個(gè)共有峰，在湖南、四川、云南、廣西、湖北和陜西黑茶各自的HPLC-DAD和HPLC-ELSD指紋圖譜共有模式中分別確定了31、29、19、27、

5、26、24個(gè)和16、16、12、16、16、18個(gè)共有峰;不同產(chǎn)地黑茶中各共有峰的平均峰面積值和平均相對(duì)峰面積值均存在一定的差異。運(yùn)用指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件對(duì)108個(gè)黑茶樣品與各自相應(yīng)產(chǎn)地的HPLC指紋圖譜共有模式間進(jìn)行了相似度比較，結(jié)果表明，除四川黑茶中的方包茶和湖南黑茶中的青磚茶外，其余102個(gè)黑茶樣品與各自相應(yīng)產(chǎn)地的HPLC指紋圖譜共有模式間的相似度均高于0.900，而18個(gè)對(duì)照茶樣與我國(guó)黑茶HPLC指紋圖譜共有模式間的相似度均低

6、于0.900。利用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)2012年生產(chǎn)的黑茶樣品的HPLC-DAD圖譜數(shù)據(jù)進(jìn)行了聚類分析，結(jié)果表明，當(dāng)臨界值為4時(shí)，來(lái)自不同產(chǎn)地的36個(gè)黑茶樣品可聚為6大類。
　　2.用茶葉中11種重要生物活性物質(zhì)的對(duì)照品溶液對(duì)各產(chǎn)地黑茶HPLC圖譜中的一些共有峰進(jìn)行了指認(rèn)。本研究中建立的色譜分析方法可用于對(duì)茶葉中兒茶素類、CAF（咖啡堿）、氨基酸類、GA（沒(méi)食子酸）等主要組分的同時(shí)分離檢測(cè)。
　　3.黑茶是一種復(fù)雜的混合物

7、體系，采用FTIR對(duì)不同產(chǎn)地的黑茶進(jìn)行研究，所反映的是黑茶中各混合組分分子吸收的疊加，只要黑茶中各組分的質(zhì)和量相對(duì)穩(wěn)定，樣品制各條件一致，其紅外光譜應(yīng)是相對(duì)穩(wěn)定的。研究了黑茶樣品的顆粒度、茶樣粉末與KBr的質(zhì)量比、掃描次數(shù)等因素對(duì)紅外光譜圖的影響，確定了樣品制備條件為:黑茶樣品粉末的顆粒度為過(guò)200目篩，茶樣粉末與KBr的質(zhì)量比為1∶100;確定掃描次數(shù)為32次;設(shè)置紅外光譜的分辨率為4 cm-1，掃描范圍為4000 cm-1～400

8、cm-1。比較了6個(gè)不同產(chǎn)地2011～2013年間生產(chǎn)的108個(gè)黑茶樣品的紅外光譜，并對(duì)各產(chǎn)地黑茶的FTIR指紋圖譜共有模式進(jìn)行了特征吸收峰歸屬的指認(rèn)和對(duì)比分析，結(jié)果表明，6個(gè)產(chǎn)地黑茶樣品的紅外光譜圖中共有14個(gè)共有峰;不同產(chǎn)地黑茶樣品的紅外光譜圖在1800 cm-1～700 cm-1波段中吸收峰數(shù)目、峰強(qiáng)度等均存在一定的差異;不同生產(chǎn)年份的黑茶，其紅外光譜圖較相似，但各共有峰的吸光度值存在差異，14個(gè)共有峰的吸光度值均隨生產(chǎn)年份越久而

9、逐漸降低。對(duì)不同產(chǎn)地黑茶紅外二階導(dǎo)數(shù)譜的相似度分析結(jié)果表明，相似度最高的為四川和陜西的黑茶，相似度為87.1％，相似度最低的為云南和陜西的黑茶，相似度為61.7％;不同產(chǎn)地黑茶各自的平均紅外二階導(dǎo)數(shù)譜與我國(guó)黑茶平均紅外二階導(dǎo)數(shù)譜的相似度均大于90.0％。對(duì)不同產(chǎn)地黑茶的36份平均紅外光譜在1800 cm-1～700 cm-1波段的吸光度值數(shù)據(jù)進(jìn)行了聚類分析，結(jié)果表明，當(dāng)臨界值為7時(shí)，各產(chǎn)地的黑茶樣品可聚為6大類。根據(jù)紅外二階導(dǎo)數(shù)譜的相似