不同產(chǎn)地黃芪HPLC-DAD指紋圖譜及黃芪黃酮類成分譜效關(guān)系研究.pdf

1、目的：采用HPLC法建立不同產(chǎn)地黃芪指紋圖譜，對黃芪黃酮類成分（Astragalus flavonoids，AFS）進行譜效關(guān)系研究，確定各色譜峰代表的化學成分信息與耐缺氧、抗炎功效的關(guān)聯(lián)程度，為黃芪多種有效成分的確定提供趨勢預測和科學數(shù)據(jù)，為黃芪質(zhì)量控制全面提升奠定基礎(chǔ)。
　　方法：（1）采用HPLC/DAD法對12批次不同地產(chǎn)黃芪藥材供試品進行分析，進一步優(yōu)化色譜條件（洗脫梯度）并完成了系統(tǒng)的方法學考察，建立黃芪藥材指紋圖譜。

2、運用“中藥色譜指紋圖譜相似性評價系統(tǒng)軟件”，進行黃芪指紋圖譜相似性評價。（2）通過大孔吸附樹脂分別對六個不同地產(chǎn)黃芪（寧夏隆德縣、寧夏彭陽縣、寧夏固原市原州區(qū)、寧夏吳忠市紅寺堡區(qū)、甘肅岷縣麻子川鄉(xiāng)、甘肅岷縣梅鄉(xiāng)鎮(zhèn)）的黃酮類成分進行富集，得到不同產(chǎn)地黃芪藥材黃酮類成分富集部位。（3）富集部位藥效研究：以二甲苯致小鼠耳腫脹法測定耳腫脹度和腫脹抑制率來評價黃芪黃酮類成分抗炎作用；以小鼠耐缺氧實驗記錄延長存活時間來評價黃芪耐缺氧功效。（4）運用

3、灰色關(guān)聯(lián)分析法研究黃芪藥材黃酮類成分富集部位指紋圖譜特征峰所代表的化學成分信息與補氣、抗炎藥效的關(guān)系，最終根據(jù)關(guān)聯(lián)度大小來確定指紋圖譜特征峰所代表的化學成分對其藥效作用貢獻程度。
　　結(jié)果：（1）通過“中藥色譜指紋圖譜相似性評價系統(tǒng)軟件”，標定出15個共有峰且以中位數(shù)法建立對照指紋圖譜，計算出待測指紋圖譜與對照圖譜的整體相似度。即12批次不同地產(chǎn)的黃芪藥材指紋圖譜相似度分別是：趙樓村0.850；聯(lián)財村0.966；聯(lián)財北山0.946

4、；陽坪村0.884；堿井村0.980；新民村0.978；康鮮種植基地0.987；開城梁0.951；沙塘鐵虛溝0.920；清涼村0.901；城陽鄉(xiāng)0.905；甘肅隴西0.858。（2）6個產(chǎn)地的黃芪藥材經(jīng)大孔吸附樹脂富集得其黃酮類成分浸膏，分別為隆德縣5.92 g、彭陽縣4.99、原州區(qū)6.21、紅寺堡區(qū)5.66g、甘肅麻子川鄉(xiāng)4.84 g、甘肅梅鄉(xiāng)鎮(zhèn)5.63 g，浸膏得率分別是11.84％、9.98%、12.42%、11.32%、9.6

5、8%、11.26%。HPLC法測定黃芪藥材富集后指紋圖譜，38min后無明顯的吸收峰出現(xiàn)。（3）在二甲苯致小鼠耳腫脹實驗中，與模型組比較，隆德縣、彭陽縣、原州區(qū)、紅寺堡區(qū)、甘肅麻子川鄉(xiāng)、甘肅梅鄉(xiāng)鎮(zhèn)6個不同地產(chǎn)黃芪富集得到的黃酮類物質(zhì)有顯著統(tǒng)計學意義（P<0.05）均有一定抗炎活性；在小鼠耐缺氧實驗中，與空白對照組比較，隆德縣、彭陽縣、原州區(qū)、紅寺堡區(qū)、甘肅麻子川鄉(xiāng)、甘肅梅鄉(xiāng)鎮(zhèn)6個不同地產(chǎn)黃芪黃酮類物質(zhì)有統(tǒng)計學意義（P<0.05），可有效

6、延長小鼠存活時間。（4）對指紋圖譜及藥效學采用灰色關(guān)聯(lián)分析法處理，結(jié)果如下：①15個共有特征峰與抗炎作用的關(guān)聯(lián)度均大于0.6，說明黃芪富集部位的藥效作用是所有化學成分共同作用的結(jié)果，且關(guān)聯(lián)度大于0.92的物質(zhì)的順序為刺芒柄花苷>保留時間為21.6 min的物質(zhì)>毛蕊異黃酮苷，在黃芪黃酮類成分中刺芒柄花苷與其抗炎作用的關(guān)聯(lián)度最大；②15個共有特征峰與耐缺氧功效的關(guān)聯(lián)度均大于0.6，說明黃芪富集部得位的藥效作用是所有化學成分共同作用的結(jié)果，

7、關(guān)聯(lián)度大于0.92的物質(zhì)的順序為刺芒柄花苷>毛蕊異黃酮苷>保留時間為21.6 min的物質(zhì)，在黃芪黃酮類成分中刺芒柄花苷與耐缺氧作用的關(guān)聯(lián)度最大，其次是毛蕊異黃酮苷。
　　結(jié)論：（1）建立12批次不同地產(chǎn)黃芪HPLC指紋圖譜并進行方法學考察和黃芪指紋圖譜相似度評價，該方法簡便易行，結(jié)果可靠；（2）通過D101大孔吸附樹脂柱層析能有效地對黃芪黃酮類成分富集；（3）藥效學試驗表明，不同地產(chǎn)黃芪富集后得到的黃酮類成分均具有不同程度的抗炎