酶和蛋白質生物標志物光學分析新方法.pdf

1、生物傳感技術已成為生命科學、分析化學重要的研究方法，并具有廣泛的應用前景。光學生物傳感器具有檢測限低、分析速度快、能夠實現實時無損分析等諸多優(yōu)點。酶、蛋白質是生命活動的物質基礎，其含量已經成為臨床診斷一些疾病的重要標志。因此，建立簡單快速檢測酶和蛋白質生物標志物的分析方法具有重要的意義。本文以兩種重要的酶-胸腺嘧啶DNA糖基化酶和組蛋白去甲基化酶，以及C-反應蛋白為研究對象，發(fā)展了檢測酶和蛋白質生物標志物光學分析新方法。具體內容包括:<

2、br>　　 (1)胸腺嘧啶DNA糖基化酶(TDG)在維持基因組完整性和表觀遺傳調控方面扮演著關鍵角色。本文報告了一種基于外切酶介導的信號放大，均相熒光法靈敏檢測TDG活性的新方法。TDG從G/T錯配中切除T而后引發(fā)內切酶Ⅳ和T7核酸外切酶兩個連續(xù)的降解反應。結果顯示，TDG酶活性測定顯示的動態(tài)范圍從0到0.083 U/μL，檢測下限為0.00018 U/μL。該檢測方法具有靈敏度高、選擇性好、重現性好、成本低、實驗設備簡單等優(yōu)點。綜上

3、表明這種策略在TDG活性和相關的生化功能研究上將有相當大的發(fā)展?jié)摿Α?br>　　 (2)發(fā)展了一種基于表面增強拉曼散射(SERS)，使用甲醛選擇性活性探針(Purpald)，通過直接觀察副產物甲醛分析組蛋白去甲基化酶活性(HDMs)的新方法。我們的傳感方法依賴于Purpald和甲醛加成產物共價結合在納米金上傳導SERS信號。這種納米傳感器在均相反應中有信噪比高、特異性強、快速、簡便和重現性好的特點。這項工作是基于SERS使用Purpa

4、ld檢測HDMs的第一個例子。我們發(fā)展的分析方法為HDMs表征和相關生物功能研究提供一個簡單、高性能的平臺。
　　 (3)我們以C-反應蛋白(CRP)為分析模型，發(fā)展了一種基于納米金的比色分析法，簡單、快速、靈敏的檢測蛋白質的新方法。CTAB穩(wěn)定的納米金顆粒與DPPC結合之后，納米金表面吸附存在了大量磷脂酰膽堿，在Ca2+的存在下磷脂酰膽堿與CRP進行配位，那么納米顆?？臻g距離縮短發(fā)生顏色改變，紫外可見吸收光譜也發(fā)生變化。據此可