非小細(xì)胞肺癌生物標(biāo)志物的定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、肺癌是目前最常見的惡性腫瘤之一，對(duì)人類健康的危害日益嚴(yán)重。目前，80％的肺癌患者就診時(shí)己屬晚期，失去了手術(shù)根治的機(jī)會(huì)，放療化療效果不佳，5年生存率低；而早期肺癌手術(shù)后5年生存率雖然較高，但肺癌發(fā)病隱匿，早期確診率低，故肺癌總的預(yù)后不良，與肺癌缺乏有效的早期診斷手段有關(guān)。臨床上急需建立快速、簡(jiǎn)便、易于為患者接受、且準(zhǔn)確可靠的肺癌無創(chuàng)診斷新方式。尋找敏感性，特異性高的早期診斷方法是目前臨床亟待解決的問題。
　　 與此同時(shí)，目前臨床應(yīng)

2、用的病理分期模式，并不能有效評(píng)估可手術(shù)的非小細(xì)胞肺癌患者接受手術(shù)治療后疾病進(jìn)展情況，特別是臨床上?？捎^察到某一特定亞組的患者，術(shù)后在較短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，影響患者預(yù)后，而用傳統(tǒng)的理論及檢測(cè)手段尚無法作出合理的解釋，因此也為患者術(shù)后制定個(gè)體化的治療方案帶來困難。
　　 生物標(biāo)志物是生理及病理狀態(tài)下可度量的生物指標(biāo)，可用于表征疾病危險(xiǎn)程度，疾病的發(fā)生與發(fā)展；生物質(zhì)譜技術(shù)作為目前定量蛋白質(zhì)組學(xué)的核心技術(shù)，對(duì)癌癥生物標(biāo)志物的研究具有

3、極大的推動(dòng)作用，為解答上述臨床疑問，滿足上述臨床需求帶來了希望的曙光。
　　 在第一部分的研究中，我們采用肺癌細(xì)胞株(A549)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)組作為定量對(duì)照，對(duì)癌細(xì)胞的各種分泌蛋白質(zhì)進(jìn)行質(zhì)量控制與評(píng)測(cè)，結(jié)果顯示該創(chuàng)新性研究策略可有效降低細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)對(duì)分泌蛋白質(zhì)組的污染，從而篩選出高質(zhì)量、癌細(xì)胞特異性的分泌蛋白質(zhì)組。我們進(jìn)一步篩選并驗(yàn)證了Plasminogen activatorInhibitor1(PAI-1)與C4b-bindi

4、ng protein(C4BP)這兩種蛋白質(zhì)在非小細(xì)胞肺癌患者與正常人血清中的表達(dá)差異。結(jié)果顯示該研究策略有助于發(fā)現(xiàn)由癌細(xì)胞分泌產(chǎn)生的肺癌候選生物標(biāo)志物。
　　 在第二部分的研究中，我們以靶向定量的質(zhì)譜技術(shù)研究肺癌血清生物標(biāo)志物，在探索階段，通過隨訪得到肺癌患者接受根治性手術(shù)治療后疾病進(jìn)展及生存數(shù)據(jù)，根據(jù)預(yù)后的異質(zhì)性進(jìn)行患者亞群分類，并根據(jù)性別、年齡、吸煙史、病理分期等因素進(jìn)行配對(duì)研究，使用鳥槍法非標(biāo)記定量技術(shù)，篩選出預(yù)后相關(guān)差

5、異表達(dá)蛋白質(zhì)。在驗(yàn)證階段，采用多重反應(yīng)檢測(cè)技術(shù)(nultiple reaction monitoring，MRM)以及酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA)分別對(duì)肺癌患者血清中的靶蛋白質(zhì)進(jìn)行絕對(duì)定量研究。結(jié)果顯示：SAA(Serumamyloid A protein)、LRG1(Lericine-rich alpha-2-glycoprotein)與C4BP這三種血清蛋白質(zhì)可作為