類風濕關節(jié)炎患者血清生物標志物的蛋白質組學研究.pdf

1、目的:
　　 通過基質輔助激光解析/電離飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)和雙向電泳(2-DE)技術比較類風濕關節(jié)炎(RA)患者、骨性關節(jié)炎(OA)患者以及健康體檢者的血清蛋白表達譜，篩選、分析差異蛋白，尋找RA的血清蛋白標志物，為此病的發(fā)病機制提供線索，為早期診斷、尋找治療的靶標提供依據(jù)。
　　 方法:
　　 將131例患者和健康體檢者血清標本隨機地分為建模組（30例RA，20例OA及21名健康體檢者）和

2、試驗組（30例RA，15例OA及15名健康體檢者）。采用弱陽離子(WCX)納米磁性微球捕獲收集血清中的相關蛋白質，所獲蛋白質經PBSⅡ-C蛋白質芯片閱讀儀繪制蛋白指紋圖譜，這些圖譜經Proteinchip和BiomarkerWizard分析之后，用BiomarkerPatternsSoftware進行識別，最終篩選出RA的特異性蛋白標志物，并優(yōu)化組合建立診斷模型。用建立的蛋白質譜模型對試驗組血清標本進行盲法預測，驗證該模型。用2-DE技

3、術對10例RA患者和10名健康體檢者的血清蛋白質進行分離，電泳凝膠經硝酸銀染色后，通過圖像掃描和初步分析篩選特異蛋白質斑點，從中選取目的蛋白質斑點，用MALDI-TOF-MS測定其膠內酶解后的肽質指紋圖譜。
　　 結果:
　　 (1)RA組和對照組之間的血清蛋白質指紋圖譜分析
　　 用MALDI-TOF-MS技術結合WCX納米磁性微球，對建模組的30例RA患者和41例對照者（20例OA患者和21名健康體檢者）的血

4、清樣本進行蛋白指紋圖譜分析，在質荷比(m/z)為2000～20000內共發(fā)現(xiàn)33個具有顯著性差異的蛋白峰。與對照組相比，RA患者血清中高表達的蛋白峰有13個，低表達的有20個。
　　 (2)RA患者血清蛋白標志物的篩選及診斷模型的建立
　　 在33個差異蛋白峰中篩選出5個診斷RA的最佳血清蛋白標志物(m/z分別為15715.5、7771.4、8959.4、8469.8和8710.8)，并建立診斷模型，敏感性為93.3％，

5、特異性為95.1％。在試驗組中進行雙盲實驗驗證，該模型對RA診斷的敏感性為86.7％，特異性為90％。
　　 (3)RA患者與健康體檢者的血清差異蛋白斑點的獲取及鑒定
　　 在實驗對象的血清2-DE圖譜中約檢測到278個蛋白質斑點，經掃描分析發(fā)現(xiàn)有15個蛋白質斑點在RA患者與健康體檢者的血清之間有顯著差異表達，從中選取清晰的、表達水平改變明顯的8個蛋白質斑點進行膠內原位酶解，這8個蛋白質經質譜分析全部鑒定出來。
　

6、　 結論:
　　 通過MALDI-TOF-MS結合WCX納米磁性微球技術成功地構建了RA診斷模型，該模型由m/z分別為15715.5、7771.4、8959.4、8469.8和8710.8的5個蛋白質組成，盲法檢測進一步證實該模型臨床診斷的高靈敏度和高特異性。這些蛋白可能參與RA的發(fā)病機制，對RA的早期診斷、早期治療等方面具有一定的價值。
　　 采用2-DE聯(lián)合質譜分析技術成功地篩選出8個RA相關蛋白，這些蛋白有望成為