非小細胞肺癌患者尿蛋白質(zhì)組的差異表達分析.pdf

1、目的：肺癌在發(fā)達國家已成為癌癥死亡的主要原因[1]，而其中非小細胞肺癌（non small cell lung cancer NSCLC）約占肺癌總數(shù)的80％。盡管不斷改善肺癌的各種診斷和治療方法，但60%非小細胞肺癌患者在接受治療時已處于晚期[2]。其5年生存率不超過10%，然而Ⅰ期非小細胞肺癌的5年生存率卻高達70%[3]。故早期診斷是非小細胞肺癌治療成功的一個關(guān)鍵因素，只有通過早期診斷后選擇優(yōu)化的治療方案，才能增加NSCLC患者的

2、治愈成功率。因此，尋找早期非小細胞肺癌臨床篩查方法和手段尤為重要。
　　尿液是除血漿之外另一種尋找潛在疾病生物標志物的重要生物材料。雖然尿液蛋白質(zhì)的表現(xiàn)主要反映在泌尿生殖系統(tǒng)疾病,多數(shù)研究也局限于腎臟和泌尿道病變。但最近數(shù)據(jù)表明，尿液蛋白質(zhì)組學(xué)分析也可高度信息化的表達在其他非泌尿系統(tǒng)疾病中，并將有可能應(yīng)用于這些疾病的臨床。又因臨床上能夠簡便、無創(chuàng)傷的獲得大量尿液標本，因此尿液蛋白質(zhì)組學(xué)研究日益受到重視[4]。鑒于尿液蛋白質(zhì)組成成分

3、和功能研究可能對某些疾病，特別是腫瘤性疾病的發(fā)生、診斷、預(yù)防和治療有很大意義，所以本研究分析比較了健康人、肺部良性病變與非小細胞肺癌患者的尿液蛋白質(zhì)組表達，以尋找差異表達蛋白質(zhì)，從而發(fā)現(xiàn)可用于非小細胞肺癌早期篩查、監(jiān)測預(yù)后和治療評估的生物標記物。最后，期望能達到針對非小細胞肺癌患者尋找一個強有力的早期篩查方法，以提高早期非小細胞肺癌確診率的目的。
　　方法：
　　本研究以200000×g超高速離心沉淀法進行非腫瘤組和非小細胞

4、肺癌患者組的尿液樣本分離，提取其尿液蛋白質(zhì)，并運用0.9%1D SDS-PAGE對部分尿液蛋白質(zhì)進行再分離后分組。對凝膠條帶脫色、還原及烷基化、選取目標膠帶，應(yīng)用乙腈、胰蛋白酶進行蛋白質(zhì)凝膠內(nèi)消化和萃取。消化后的蛋白質(zhì)及肽段混合物進一步使用MS-Thermo-Orbitrap-Velos分析儀對蛋白質(zhì)及肽段逐一予以鑒定識別，所得質(zhì)譜數(shù)據(jù)應(yīng)用MASCO軟件通過NCBI-Human數(shù)據(jù)庫進行數(shù)據(jù)分析，鑒定提取出尿液中所包含的所有蛋白質(zhì)。同時

5、，通過數(shù)據(jù)搜索和分析得到相關(guān)差異表達蛋白質(zhì)，初步確定出非小細胞肺癌早期篩查的候選生物學(xué)標記物。最后，選取臨床病理證實的10例NSCLC患者和10例非腫瘤人群的尿液樣本進行實驗驗證，以明確所選非小細胞肺癌候選生物標記物的敏感性和特異性。從而最終確定出與臨床NSCLC相關(guān)的生物學(xué)標志物以及進行臨床篩查和診斷的優(yōu)化模式。
　　結(jié)果：
　　非小細胞肺癌患者組和非腫瘤組尿液蛋白質(zhì)在0.9%1D SDS-PAGE中差異性表達主要集中表現(xiàn)

6、于90kDa、60kDa和20kDa-30kDa凝膠條帶中。非小細胞肺癌組鑒定出蛋白質(zhì)數(shù)1194-2813，平均值2001±363.1；對照組鑒定出蛋白質(zhì)數(shù)1313-2740，平均值1967±505.0。其中在NSCLC患者尿液蛋白質(zhì)中確定出4種差異表達蛋白質(zhì)，包括上調(diào)蛋白LRG1、CA1和下調(diào)蛋白VPS4B、YWHAZ。而這四種差異表達蛋白在作為非小細胞肺癌獨立生物標記物篩查模式時，其敏感性較低，但采用這4種差異蛋白質(zhì)組合篩查模式對N

7、SCLC進行篩查和診斷，其敏感性得到明顯提高。
　　結(jié)論：
　　1、尿液是一種攜帶有多種蛋白質(zhì)、多肽和氨基酸的生物流體，并且因尿液蛋白質(zhì)檢測具有取材容易、無損傷、靈敏、特異等優(yōu)點。因此，檢測尿液蛋白質(zhì)組成，對腫瘤性疾病的早期診斷、疾病進程及預(yù)后判斷具有重要價值。
　　2、在非小細胞肺癌患者尿液蛋白質(zhì)分析中 LRG1、CA1蛋白質(zhì)的表達與NSCLC發(fā)生、發(fā)展呈正相關(guān)，而VPS4B、YWHAZ蛋白質(zhì)的表達與NSCLC發(fā)生、