垂體瘤患者血清差異蛋白質(zhì)組學(xué)的研究.pdf

1、研究背景：
　　垂體瘤是常見的顱內(nèi)腫瘤之一，目前發(fā)病機(jī)制尚未明確。血清蛋白組學(xué)方法可以通過高通量的方式在蛋白整體水平上揭示腫瘤的發(fā)病機(jī)制，對腫瘤診斷和預(yù)后以及尋找特異性標(biāo)記物及藥物治療的靶點有所幫助。
　　表面增強激光解析電離-飛行時間質(zhì)譜（Surface Enhanced Laser
　　Desorption/lionization Time Of Flight Mass Spectrometry，SELDI-TOF

2、-MS）技術(shù)是目前新興的一種蛋白質(zhì)組學(xué)研究工具。這種技術(shù)是應(yīng)用基因芯片的原理，把質(zhì)譜技術(shù)，層析和蛋白質(zhì)芯片技術(shù)相結(jié)合的研究方法，具有自動化，靈敏，快速，高通量等特點，對疾病診斷尤其是腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)具有重大的意義。這種技術(shù)在多種腫瘤的研究應(yīng)用中顯示出廣闊的前景。
　　目的：
　　本項目擬通過對各型垂體瘤患者和健康對照組血清分別進(jìn)行比較蛋白組學(xué)分析，篩選垂體瘤患者血清的差異蛋白，對差異蛋白進(jìn)行質(zhì)譜分析及生物學(xué)鑒定，并挑選差異蛋白

3、進(jìn)行深入研究，評價其與各型垂體瘤的關(guān)系,為臨床診斷和治療提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
　　研究方法：
　　實驗標(biāo)本，取自臨床和病理診斷為垂體瘤患者的用藥前或術(shù)前的血；對照標(biāo)本，取自經(jīng)臨床和影像學(xué)診斷無垂體瘤的健康志愿者。本研究不包括糖尿病、心血管疾病和其他疾病的患者,患者均無其他惡性腫瘤病史,也未伴發(fā)需要治療的功能性疾病、細(xì)菌或真菌感染，并且垂體瘤患者與健康志愿者的年齡范圍和性別相匹配。靜脈穿刺取血5ml→室溫凝固15min后，

4、2000g離心15min→取上清,分裝，-80℃保存。運用 ProteoMinerTM試劑盒去除高豐度蛋白后蛋白標(biāo)記，蛋白標(biāo)記后行質(zhì)譜分析。從而闡明早期垂體瘤細(xì)胞病理變化的機(jī)制，提供可靠的生物標(biāo)記物用于診斷無癥狀或影像表現(xiàn)陰性的早期垂體腺瘤或術(shù)后復(fù)發(fā)的垂體瘤，為臨床診斷和治療提供依據(jù)。
　　結(jié)果：
　　在課題進(jìn)行期間，取自臨床和病理診斷為垂體瘤患者的用藥前或術(shù)前的血清8份，取自經(jīng)臨床和影像學(xué)診斷無垂體瘤的健康志愿者20份。<

5、br>　　1.差異蛋白質(zhì)峰的初步篩選及比較
　　通過SELDI蛋白指紋圖譜儀對8例垂體瘤患者及20例健康對照者的血清樣本進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，Biomarker Wizard進(jìn)行初步分析統(tǒng)計后，在M/Z0-20000范圍共得到65個蛋白質(zhì)峰。其中23個蛋白質(zhì)峰在兩組之間有顯著性差異（P<0.01），15個蛋白峰在垂體瘤患者組中表達(dá)量明顯升高。8個蛋白峰表達(dá)量降低
　　2.經(jīng)Biomark Pattern Software軟件Biom

6、arker Wizard軟件獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析并處理，選擇差異蛋白質(zhì)峰建立決策樹模型。采用決策樹分類分析法，BPS分析選出M/Z為3525.02的蛋白質(zhì)峰構(gòu)建血清差異蛋白決策樹分類診斷模型，該蛋白質(zhì)峰在垂體瘤患者組中表達(dá)明顯升高。
　　3.該診斷模型組對8例垂體瘤患者全部正確診斷，假陽性1例。該模型組判別總準(zhǔn)確率96.4％，靈敏度100%，特異度95%
　　結(jié)論：
　　1.本實驗通過選取CM10芯片分別檢測了垂體瘤患者

7、組和健康對照組患者的血清樣本，具有很好的穩(wěn)定性和重復(fù)性。
　　2.本實驗中通過運用ProteoMinerTM試劑盒去除高豐度蛋白后，使低豐度蛋白更好的顯露，選取CM10芯片檢測血液樣本，得到較理想的結(jié)果。
　　3.通過 SELDI蛋白指紋圖譜儀對垂體瘤患者組及健康對照組的血清樣本進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，Biomarker Wizard進(jìn)行初步分析統(tǒng)計后，在M/Z0-20000范圍共得到65個蛋白質(zhì)峰，其中23個蛋白質(zhì)峰在兩組之間有顯著

8、性差異（P<0.01），15個蛋白峰在垂體瘤患者組中表達(dá)量明顯升高。8個蛋白峰表達(dá)量降低。經(jīng) Biomark Pattern Software軟件Biomarker Wizard軟件獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析并處理，選擇差異蛋白質(zhì)峰建立決策樹模型。采用決策樹分類分析法，BPS分析選出M/Z為3525.02的蛋白質(zhì)峰構(gòu)建血清差異蛋白決策樹分類診斷模型，該蛋白質(zhì)峰在垂體瘤患者組中表達(dá)明顯升高。
　　4.該診斷模型組對8例垂體瘤患者全部正確診斷