脊髓室管膜瘤的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、第一部分：基于雙向凝膠電泳的正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤差異表達(dá)蛋白的篩選與鑒定
　　目的：應(yīng)用雙向凝膠電泳(2-DE)和基質(zhì)輔助激光解吸離子電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)的蛋白組學(xué)方法，研究正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤的差異表達(dá)蛋白質(zhì)，為進(jìn)一步探索脊髓室管膜瘤的發(fā)病機(jī)制提供基礎(chǔ)。
　　方法：收集7例脊髓室管膜瘤患者的術(shù)中標(biāo)本作為腫瘤組，4例新鮮尸體解剖得到的脊髓室管膜標(biāo)本作為對(duì)照組。將2組標(biāo)本裂解后提取蛋白質(zhì)

2、，定量后的蛋白質(zhì)進(jìn)行IEF和SDS-PAGE雙向電泳分離，得到的2-DE圖譜經(jīng)考馬斯亮蘭染色后，通過(guò)軟件找到差異蛋白點(diǎn)并且使用MALDI-TOF-MS技術(shù)進(jìn)行鑒定，最終獲得了腫瘤組和對(duì)照組的差異蛋白質(zhì)，部分差異蛋白質(zhì)進(jìn)行了Western Blot驗(yàn)證。
　　結(jié)果：建立了基于2-DE串聯(lián)MALDI-TOF-MS的正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤差異表達(dá)蛋白篩選與鑒定的技術(shù)路線。成功鑒定出50個(gè)有效的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)(其中腫瘤組較對(duì)照組上調(diào)2

3、4個(gè)，下調(diào)13個(gè)，僅在腫瘤組中表達(dá)10個(gè)，僅在對(duì)照組表達(dá)3個(gè))。Western Blot試驗(yàn)證實(shí)了差異蛋白Vimentin、Annexin I和HSPA8在腫瘤組中的高表達(dá)。
　　結(jié)論：應(yīng)用2-DE串聯(lián)MALDI-TOF-MS技術(shù)成功對(duì)正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤進(jìn)行蛋白組學(xué)分析，建立具有高分辨率及可重復(fù)性的2-DE圖譜，有效篩選并成功鑒定了50個(gè)差異蛋白質(zhì)。其中的Vimentin、AnnexinI、HSPA8、Calnexin和

4、Calreticulin等蛋白可能與脊髓室管膜瘤的發(fā)病機(jī)理有關(guān)。
　　第二部分：應(yīng)用三維SDS-PAGE-SCX-RPLC-Ms/MS技術(shù)研究脊髓室管膜瘤和正常脊髓室管膜的蛋白表達(dá)譜
　　目的：串聯(lián)應(yīng)用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、強(qiáng)陽(yáng)離子交換(SCX)、反相液相色譜(RPLC)和串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)的蛋白組學(xué)方法，研究正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤的全蛋白質(zhì)表達(dá)譜，為進(jìn)一步探索脊髓室管膜瘤的發(fā)病機(jī)

5、制提供基礎(chǔ)。
　　方法：收集7例脊髓室管膜瘤患者的術(shù)中標(biāo)本作為腫瘤組，2例手術(shù)中取得的脊髓室管膜標(biāo)本作為對(duì)照組。將2組標(biāo)本裂解后提取蛋白質(zhì)，定量后的蛋白質(zhì)先進(jìn)行SDS-PAGE-維電泳分離，得到的膠條經(jīng)切割和酶解后，再通過(guò)SCX-RPLC分離，分離后的肽段通過(guò)LTO-Orbitrap行鑒定，鑒定數(shù)據(jù)經(jīng)Sequet數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，最終獲得了腫瘤組和對(duì)照組的全蛋白質(zhì)表達(dá)譜。應(yīng)用生物信息學(xué)平臺(tái)DAVID和KEGG對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行了功能分類(lèi)和病理

6、通路分析。
　　結(jié)果：建立了應(yīng)用于正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤蛋白質(zhì)表達(dá)譜研究的三維SDS-PAGE-SCX-RPLC-MS/MS技術(shù)平臺(tái)。從正常脊髓室管膜組織和脊髓室管膜瘤中分別鑒定出了2758和2721個(gè)蛋白質(zhì)。
　　結(jié)論：首次應(yīng)用三維SDS-PAGE-SCX-RPLC-MS/MS技術(shù)開(kāi)展了正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤全蛋白表達(dá)譜的研究，建立了脊髓室管膜和脊髓室管膜瘤的蛋白表達(dá)譜。表達(dá)于腫瘤組和對(duì)照組的蛋白質(zhì)在分子量和等