冠心病蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的:冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。╟oronary artery disease，CAD，冠心?。┦亲钪饕男难芗膊≈?，每年在全球約有8，140，000人死于冠心病，占到死亡總?cè)藬?shù)的16.8％。有關(guān)冠心病的病因和發(fā)病機(jī)制，目前有多種假說，但確切的機(jī)制尚未明確。文獻(xiàn)中有不少關(guān)于冠心病分子生物學(xué)機(jī)制的研究成果，這些發(fā)現(xiàn)為理解冠心病的發(fā)病機(jī)制提供了各種依據(jù)。利用全基因組關(guān)聯(lián)研究(genome wideassociation study，GW

2、AS)的方法，至少已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有100多處單核苷酸變異(singlenucleotide variants，SNVs)與冠心病發(fā)病相關(guān)。與此同時(shí)，也出現(xiàn)了不少研究血漿蛋白變化與某些可能與冠心病相關(guān)病理過程，如:炎癥反應(yīng)、血小板活化、凝血功能等關(guān)系的研究。然而，參與冠心病發(fā)病的蛋白質(zhì)，尤其是在那些需要接受冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)(coronary artery bypass grafting，CABG)的復(fù)雜冠脈病變中的蛋白質(zhì)，其變化趨勢(shì)可能尤為復(fù)

3、雜，目前也沒有相關(guān)的研究。本研究的目的在于借助同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量技術(shù)(Isobaric tags for relative and absolutequantitation，iTRAQ)，將患有三支病變合并/不合并左主干病變、需要行CABG術(shù)的患者的血漿與非冠心病患者進(jìn)行比較，從而找出特殊表達(dá)的蛋白質(zhì)組。
　　方法:從2013年4月22日至2015年9月24日，共有320名行冠脈造影檢查的受試者序貫入選本研究，并分為兩組:C

4、ABG組（160人，冠心病，行CABG術(shù)）、Control組（對(duì)照組160人）。CABG組的患者均為經(jīng)冠脈造影證實(shí)存在三支病變合并/不合并左主干病變者;Control組的160名患者則經(jīng)冠脈造影檢查排除了冠心病的可能。入選者排除標(biāo)準(zhǔn):二次心臟手術(shù);神經(jīng)系統(tǒng)疾病(如:腦血管事件(CVA));嚴(yán)重的肺部疾?。ǚ喂δ軝z查提示暫不宜手術(shù)者）;腎功能衰竭（術(shù)前測(cè)定肌酐、尿素氮）;肝臟疾?。ㄐg(shù)前測(cè)定轉(zhuǎn)氨酶）;活動(dòng)性炎性疾病;術(shù)前有凝血性疾病;術(shù)前有

5、房顫病史;甲狀腺功能異常。在進(jìn)行CABG手術(shù)前或造影術(shù)中，使用EDTA管收集血液標(biāo)本2ml。將收集到的血樣盡快用3，500rpm離心15min，將上層血漿小心分離至凍存管中，標(biāo)記編號(hào)，并放置于-80℃的低溫冰箱內(nèi)。在兩組中分別選出隨機(jī)選出20例男性、20例女性的血漿標(biāo)本，共4組80例標(biāo)本。每例標(biāo)本取100ul，按組混合為2ml的樣本，4份樣本分別標(biāo)記為:CABGM（CABG組，男性），CABGF（CABG組，女性），CM（control

6、組，男性）及CF（control group，女性），用于iTRAQ檢測(cè)。使用Mascot搜索引擎完成蛋白檢索、定量分析。各組蛋白差異蛋白倍數(shù)大于1.2且p＜0.05時(shí)，確定為差異蛋白。利用CABG組（n=120，男性=61）和control組(n=120，男性=60)的血漿標(biāo)本，選取差異蛋白中的6種進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(humanenzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）驗(yàn)證。
　　結(jié)果:i

7、TRAQ測(cè)定共檢測(cè)出544種蛋白，其中有35種蛋白上調(diào)表達(dá)，41種蛋白下調(diào)表達(dá)（CABG vs.control，p＜0.05）。選取的6種蛋白質(zhì)中，凝血因子ⅩⅢ B鏈(coagulation factorⅩⅢ B chain，F(xiàn)13B)、血小板因子4(platelet factor4，PF4)及分泌型卷曲相關(guān)蛋白1(secreted frizzled-related protein1，sFRP1)上調(diào)表達(dá)，維生素D結(jié)合蛋白(vitami

8、n D-binding protein，DBP)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，G3PDH）及備解素(properdin，CFP)下調(diào)表達(dá)(p＜0.05)。在ELISA檢測(cè)中，CFP、DBP、PF4及sFRP1的血漿水平明顯上調(diào)（CABG vs.control，p＜0.05）。其中DBP、PF4和sFRP1均與冠心病、心肌梗死病史分別呈正相關(guān)關(guān)系(p＜0.05)

9、。PF4行ROC檢測(cè)，其曲線下面積為0.858，最佳工作點(diǎn)為1021.00，該點(diǎn)的敏感度為77.4％，特異度為93.3％(YI=0.707)。
　　結(jié)論:本研究中共發(fā)現(xiàn)76種蛋白質(zhì)的表達(dá)在冠心病患者和非冠心病患者之間存在差異。參與凝血、血小板活化、補(bǔ)體激活及Wnt/fz信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的蛋白，可能在冠心病的發(fā)病過程中發(fā)揮著重要的作用。PF4和sFRP1在復(fù)雜血管病變的冠心病患者中的表達(dá)明顯上調(diào)。ROC測(cè)試提示，PF4在臨床上可作為輔助