蛋白質(zhì)組學技術分析大鼠星形細胞和C-,6-細胞的蛋白差異.pdf

1、背景及目的：已有研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)干細胞移植至有移植膠質(zhì)瘤生長的鼠腦內(nèi)，神經(jīng)干細胞很快充滿腫瘤，并沿著浸潤的腫瘤細胞分布，即使將神經(jīng)干細胞接種在腫瘤的遠隔部位，甚至把神經(jīng)干細胞接種在對側(cè)的大腦半球和側(cè)腦室，它們也能穿過正常腦組織移行入膠質(zhì)瘤；甚至注射入靜脈系統(tǒng)的神經(jīng)干細胞都不同程度的聚集在膠質(zhì)瘤內(nèi)，而非注射局部。這說明膠質(zhì)瘤細胞中存在著誘導神經(jīng)干細胞遷移和分化的信號物質(zhì)，在體內(nèi)可以誘導神經(jīng)干細胞向膠質(zhì)瘤遷移。而且體外實驗證明C6膠質(zhì)瘤細胞無血

2、清培養(yǎng)的上清中也存在著能夠誘導神經(jīng)干細胞遷移的物質(zhì)。同時研究也表明星形膠質(zhì)細胞對神經(jīng)干細胞無遷移作用。本研究則是利用蛋白質(zhì)組學技術分析C6膠質(zhì)瘤細胞和星形膠質(zhì)細胞之間的蛋白表達差異，找出膠質(zhì)瘤細胞中存在促進神經(jīng)干細胞的遷移的物質(zhì)基礎，并為進一步分離、純化該物質(zhì)做準備。 方法：從新生3.5天的SD大鼠大腦皮層中培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞，同時培養(yǎng)C6膠質(zhì)瘤細胞。分別提取細胞總蛋白，進行第一向等電聚焦(IEF)和第二向十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺

3、凝膠電泳(SDS-PAGE)技術分離總蛋白，Bio-SafelMCommassie染色，GS-800密度掃描儀獲取圖像，并測量凝膠蛋白斑點的在IEF和SDS-PAGE方向上的位置偏差。利用PDQuest軟件對凝膠圖像進行分析，以識別差異表達的蛋白質(zhì)。 結果：通過軟件分析發(fā)現(xiàn)，星形膠質(zhì)細胞組和C6膠質(zhì)瘤細胞組三塊凝膠的平均蛋白質(zhì)點數(shù)分別為523.12±16.32和549.62±19.61，平均匹配點數(shù)分別為452.37±17.78

4、和471.69±20.76，匹配率達86.46％和85.82％。不同凝膠間蛋白質(zhì)點在IEF方向的偏差為(0.67±0.48)rIllTl，在SDS-PAGE方向上的偏差為(0.73±0.56)mm。星形膠質(zhì)細胞和C6膠質(zhì)瘤細胞的蛋白質(zhì)點通過分析比較，發(fā)現(xiàn)有24個點發(fā)生了明顯和穩(wěn)定的質(zhì)和量的改變，其中2個點在星形膠質(zhì)細胞中沒有發(fā)現(xiàn)表達，14個點在C6膠質(zhì)瘤細胞中表達明顯上調(diào)，8個點明顯下調(diào)。 結論：星形膠質(zhì)細胞和C6膠質(zhì)瘤細胞的雙