成年及幼年大鼠硬腦膜差異蛋白質(zhì)組學研究.pdf

1、目的：幼年動物具有很強的顱骨缺損自行修復(fù)能力，當動物進入成年后這種能力很快消失。既往文獻報道硬腦膜在顱骨再生中發(fā)揮了關(guān)鍵作用，其中幼年大鼠硬腦膜有一些獨特的特點與顱骨缺損自行修復(fù)相關(guān)。但顱骨缺損自行修復(fù)過程中的分子生物學機制并不完全清楚，并且目前沒有相關(guān)的蛋白質(zhì)組學研究。 材料與方法：1、采用雙向電泳技術(shù)，對樣品的處理、上樣量、等電聚焦、SDS-PAGE電泳等步驟進行優(yōu)化。2、應(yīng)用雙向電泳、質(zhì)譜及Western-blot技術(shù)篩選

2、并鑒定成年及幼年大鼠硬腦膜中差異表達的蛋白質(zhì)。3、對大鼠硬腦膜細胞原代培養(yǎng)，觀察硬腦膜細胞體外培養(yǎng)的細胞形念和細胞增殖活性；應(yīng)用透射電子顯微鏡，對硬腦膜細胞超微結(jié)構(gòu)進行觀察比較。 結(jié)果：1、獲得重復(fù)性和分辨率比較好的成年及幼年大鼠硬腦膜蛋白雙向電泳圖譜；2、比較成年及幼年大鼠硬腦膜蛋白雙向電泳圖譜，發(fā)現(xiàn)24個差異表達蛋白質(zhì)(豐度相差3倍以上)，鑒定出11個蛋白質(zhì)(均為首次報道)，其中幼年大鼠硬腦膜蛋白上調(diào)的有：Cytoskele

3、ton-associated protein 4，vimentin，type II keratin，β-actin，γ-actin，Apolipoprotein A-IV precursor,alpha-tropomyosin和TCTP1；成年大鼠硬腦膜蛋白上調(diào)的有：COMM domain containing 7，albumin和RAB5-interacting protein；3、Western-blot結(jié)果顯示在幼年大鼠硬腦膜vi

4、mentin，tropomyosin，β-actin和γ-actin水平分別是成年大鼠硬腦膜的3.2，2.4，3.6和2.2倍，這與雙向電泳/質(zhì)譜結(jié)果一致；4、在體外培養(yǎng)中，成年硬腦膜細胞于10～15天后呈貼壁生長，25～30天出現(xiàn)細胞融合。幼年硬腦膜細胞于5～8天后呈貼壁生長，12～15天出現(xiàn)細胞融合。5、成年大鼠硬腦膜細胞呈梭形，細胞核狹長，細胞核質(zhì)比約為1：2.5～3，細胞器比較發(fā)達，膠原排列整齊、致密；幼年大鼠硬腦膜細胞呈橢圓形