犢牛與成年牛卵泡液差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析.pdf

1、幼畜體外胚胎培養(yǎng)體系(JIVET)對于充分挖掘優(yōu)良母畜的生產(chǎn)潛能具有重要意義，不僅有助于加快遺傳改良的進(jìn)程，而且對于商品化胚胎生產(chǎn)也是具有重大的推動(dòng)作用。犢牛卵母細(xì)胞體外發(fā)育能力遠(yuǎn)低于成年牛，卵泡液是卵母細(xì)胞生長發(fā)育的微環(huán)境，卵母細(xì)胞體外發(fā)育潛能與卵泡液中蛋白成分緊密相關(guān)。本研究以超數(shù)排卵后犢牛和成年牛卵泡液為研究對象，利用基質(zhì)輔助激光解離串聯(lián)時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(MALDI-TOF MS)對卵泡液中多肽進(jìn)行差異分析，并利用雙向電泳技術(shù)對卵泡液

2、蛋白質(zhì)組學(xué)進(jìn)行差異蛋白比較。通過這兩種技術(shù)對卵泡液中蛋白質(zhì)組學(xué)進(jìn)行全面分析，試圖找到與卵母細(xì)胞生長發(fā)育相關(guān)的關(guān)鍵多肽和差異蛋白，為犢牛卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)體系的完善奠定理論基礎(chǔ)。本試驗(yàn)的研究結(jié)果總結(jié)如下。
　　 1.采用基質(zhì)輔助激光解離串聯(lián)時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(MALDI-TOF MS)對新鮮卵泡液多肽成分進(jìn)行分析。分別成功構(gòu)建了兩組卵泡液的質(zhì)譜多肽信號峰模型圖譜;在成年牛組中出現(xiàn)30-40個(gè)信號峰，犢牛中有60-80個(gè);其中成年牛卵泡液有

3、2個(gè)特有信號峰，核質(zhì)比分別為1218.58(m/z)和1509.77(m/z)，犢牛有1個(gè)特有信號峰，核質(zhì)比為953.54（m/z）;利用MASCOT庫對獲得卵泡液中多肽進(jìn)行對比，成年牛組發(fā)現(xiàn)有18種蛋白，犢牛組有11種蛋白，其中僅有1種共有蛋白是牛晶體結(jié)構(gòu)修飾纖維蛋白A鏈。
　　 2.采用雙向電泳技術(shù)對犢牛和成年牛卵泡液中蛋白質(zhì)組學(xué)分析。采用24cm膠條，上樣量350微克，在pH4-7范圍內(nèi)成功構(gòu)建出犢牛和成年牛卵泡液蛋白質(zhì)組

4、學(xué)圖譜，犢牛卵泡液圖譜中存在319個(gè)蛋白點(diǎn)，成年牛338個(gè)蛋白點(diǎn)。對差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜技術(shù)鑒定，結(jié)果表明:成年牛卵泡液中存在1個(gè)表達(dá)量低于犢牛的蛋白點(diǎn)為腫瘤壞死因子α，犢牛中存在3個(gè)表達(dá)量低于成年牛蛋白點(diǎn)，分別為轉(zhuǎn)鐵蛋白、卵母細(xì)胞成熟因子mos、BCL2L12。
　　 本文總結(jié):(1)對犢牛與成年牛卵泡液中多肽信息差異進(jìn)行分析，僅發(fā)現(xiàn)一個(gè)共有蛋白，即牛晶體結(jié)構(gòu)修飾纖維蛋白A鏈;(2)在對卵泡液差異蛋白分析中，成功鑒定出了4種蛋白