大鼠移植肺的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、研究背景：肺移植已成為治療終末期肺部疾病的有效方法。隨著肺保存質(zhì)量的提高、外科技術(shù)和麻醉方法的改進(jìn)、高效抗生素的應(yīng)用以及免疫抑制劑的發(fā)展等，肺移植獲得了較大的進(jìn)展，肺移植患者的生活質(zhì)量得到了明顯改善。但是，供體的缺乏，移植后排斥反應(yīng)、閉塞性細(xì)支氣管炎仍然是影響肺移植數(shù)量及移植后患者長期生存的主要問題。尤其是肺移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)始終是影響著肺移植患者長期存活的關(guān)鍵。肺移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)確切的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚。1995年3月國際心肺

2、移植協(xié)會(huì)在匹茲堡醫(yī)學(xué)中心召開了第二次工作會(huì)議，指出急性排斥反應(yīng)的主要病理診斷依據(jù)是支氣管、血管周圍及間質(zhì)的單核細(xì)胞浸潤，但在急性肺排斥的分級中應(yīng)述及并存的氣道炎癥及其分級。慢性排斥反應(yīng)分兩種：①阻塞性細(xì)支氣管炎；②血管性粥樣硬化癥。目前認(rèn)為慢性排斥反應(yīng)是以免疫因素為主的多因素參與的細(xì)支氣管增殖型病變，表現(xiàn)為局部持續(xù)的炎癥反應(yīng)，細(xì)支氣管上皮損傷，內(nèi)膜增生，纖維結(jié)締組織增殖，導(dǎo)致管腔閉塞，肺組織實(shí)變。肺移植術(shù)后的免疫抑制治療一直是人們關(guān)注的

3、焦點(diǎn)，但臨床上并沒有統(tǒng)一的免疫抑制方案?；蛑委熓怯锌赡芙鉀Q排斥反應(yīng)的方法之一，但實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)還有很長遠(yuǎn)的距離。 蛋白質(zhì)組學(xué)是以蛋白質(zhì)組為研究對象，從整體的角度，分析細(xì)胞內(nèi)動(dòng)態(tài)變化的蛋白質(zhì)組成與活動(dòng)規(guī)律。其研究主要涉及兩方面的 內(nèi)容：一是研究蛋白質(zhì)組的組成，即表達(dá)蛋白質(zhì)組學(xué)；二是研究蛋白質(zhì)組的功能，即功能蛋白質(zhì)組學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)主要由雙向凝膠電泳技術(shù)、蛋白質(zhì)鑒定技術(shù)和生物信息學(xué)技術(shù)組成。應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，可獲得在不同

4、生理或病理階段細(xì)胞、組織或器官內(nèi)表達(dá)的全部蛋白質(zhì)信息，并可作為各種疾病基礎(chǔ)研究的技術(shù)平臺(tái)。近期國內(nèi)外已成功地將蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)引入肺疾病研究領(lǐng)域，主要包括：(1)正常肺組織蛋白質(zhì)組研究；(2)肺支氣管病變的蛋白質(zhì)組研究。故若能直接從蛋白質(zhì)入手來研究肺移植后排斥反應(yīng)將更全面、客觀地揭示肺移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)的發(fā)病機(jī)制，為肺移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)的診斷和防治開辟新的思路、提供新的線索。 目的：建立異體大鼠左肺移植模型，觀察、分析

5、移植肺形態(tài)學(xué)改變；應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)測定在肺移植后不同時(shí)段移植肺組織的蛋白質(zhì)組變化，找出不同時(shí)間段蛋白質(zhì)組變化的信息數(shù)據(jù)，分析移植肺動(dòng)態(tài)變化的差異蛋白質(zhì)，確定肺移植后免疫排斥反應(yīng)發(fā)生相關(guān)的特異蛋白質(zhì)，更深入地闡明肺移植后免疫排斥反應(yīng)發(fā)生、發(fā)展的可能機(jī)制。 方法： (1)建立大鼠左肺原位異體移植模型 以Wister大鼠為供體，SD大鼠為受體，行大鼠左肺原位異體移植。分為3組：正常Wister大鼠作為對照組；移植后急性排斥

6、反應(yīng)組(術(shù)后1周)；移植后慢性排斥反應(yīng)組(術(shù)后6周)。肺移植組常規(guī)給予免疫抑制劑治療，分組喂養(yǎng)后按照規(guī)定時(shí)間收獲移植肺標(biāo)本，正常對照組為未經(jīng)任何處理的Wister大鼠肺臟，計(jì)算肺濕／干比值，肺標(biāo)本石蠟包埋，切片，HE、VG染色，行肺組織形態(tài)學(xué)觀察。 (2)在第一步的基礎(chǔ)上，進(jìn)行移植后肺組織的蛋白質(zhì)組學(xué)分析，對移植后兩組16只大鼠肺組織(急慢性排斥組各8只)和配對的正常肺組織進(jìn)行比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究，即利用固相pH梯度(IPG)雙向

7、凝膠電泳(2-DE)分離大鼠移植后肺組織和正常肺組織的總蛋白質(zhì)，考馬斯亮藍(lán)染色后經(jīng)圖像分析識(shí)別差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MAI-DI-TOF-MS)鑒定差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)。分析差異表達(dá)蛋白質(zhì)的功能及與肺移植后免疫排斥相關(guān)疾病的關(guān)系。 結(jié)論： (1)采用比較蛋白質(zhì)組學(xué)方法成功鑒定13個(gè)與肺移植后疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)。 (2)大鼠肺移植后肺組織發(fā)生能量代謝變化，糖酵解增強(qiáng)，應(yīng)激反應(yīng)降低，自我