大鼠機械性腦損傷動態(tài)變化的蛋白質(zhì)組學研究.pdf

1、目的：建立體外培養(yǎng)神經(jīng)細胞和大鼠創(chuàng)傷性腦損傷動物模型，研究損傷后培養(yǎng)神經(jīng)細胞形態(tài)學改變和大鼠海馬蛋白質(zhì)組表達情況，尋找差異性生物標志蛋白。 方法：選新生24小時內(nèi)SD大鼠，取海馬組織，培養(yǎng)10-14天后，隨機分為對照組及損傷后4h、8h、12h、24h和48h組，復(fù)制Scott's神經(jīng)細胞液壓沖擊損傷模型，進行神經(jīng)細胞形態(tài)學觀察。選成年雄性SD大鼠隨機分為手術(shù)對照組及損傷后4h、8h、12h、24h和48h組，復(fù)制Marmaro

2、u's落體打擊大鼠腦損傷模型，采用雙向凝膠電泳技術(shù)分析大鼠閉合性腦損傷后不同時間海馬中蛋白質(zhì)組表達的改變。 結(jié)果：1體外培養(yǎng)神經(jīng)細胞液壓沖擊損傷裝置穩(wěn)定性評價：通過記錄小室內(nèi)和有機玻璃管內(nèi)的壓力大小來檢測液壓沖擊損傷壓力的大小，結(jié)果表明，小室內(nèi)和有機管內(nèi)的壓力存在一線性關(guān)系(Y=4.4763X+0.2986，Y代表有機玻璃管內(nèi)壓力，X代表小室內(nèi)壓力)，造成細胞損傷力的大小以小室內(nèi)的壓力為準。有機玻璃管和小室內(nèi)壓力隨鐘擺打擊角度的

3、增加而增大。輕(0.1MPa)、中(0.2MPa)和重度(0.3MPa)液壓沖擊損傷所需鐘擺下落角度分別為13.5°、21.5°和27°。2液壓沖擊損傷神經(jīng)細胞形態(tài)學改變：液壓沖擊后，神經(jīng)細胞甲苯胺藍染色，正常神經(jīng)細胞胞核呈藍色，胞漿染成淡藍色，損傷組培養(yǎng)神經(jīng)細胞主要表現(xiàn)為部分神經(jīng)細胞胞體濃縮，胞核固縮，染色較深，呈深藍色，多為壞死型損傷細胞，甲苯胺藍染色，壞死型損傷細胞較正常細胞深染，各損傷組神經(jīng)細胞可見不同程度損傷，損傷后8h達高峰

4、，隨后逐漸恢復(fù)接近正常。 3蛋白質(zhì)雙向電泳結(jié)果：(1)在pH3-10膠條上，損傷后共有65個蛋白質(zhì)點的相對強度與手術(shù)對照組相比有顯著性差異(P＜0.05)，有32個蛋白質(zhì)點在損傷組未檢測到，7個蛋白質(zhì)點僅在損傷組檢測到(2)在pH4-7膠條上，損傷后共有44個蛋白質(zhì)點的相對強度與手術(shù)對照組相比有顯著性差異(P＜0.05)，有6個蛋白質(zhì)點在損傷組未檢測到，17個蛋白質(zhì)點僅在損傷組檢測到(3)在pH3-10膠條上，與手術(shù)對照組比較，

5、損傷組中有9個蛋白質(zhì)點在兩個或以上時間點未檢測到；1個蛋白質(zhì)點在損傷后8h、12h未檢測到；2個蛋白質(zhì)點在損傷后8h、48h未檢測到；1個蛋白質(zhì)點在損傷后24h、48h未檢測到；4個蛋白質(zhì)點在8h、12h、48h未檢測到；1個蛋白質(zhì)點在4h、8h、12h、24h、48h未檢測到；2個蛋白質(zhì)點僅在8h未檢測到；1個蛋白質(zhì)點僅在12h未檢測到；4個蛋白質(zhì)點僅在48h未檢測到。與手術(shù)對照組比較，損傷組中有1個蛋白質(zhì)點在兩個或以上時間點可以檢測

6、到；1個蛋白質(zhì)點在損傷后8h、12h、24h、48h可以檢測到；1個蛋白質(zhì)點僅在損傷后8h可以檢測到；2個蛋白質(zhì)點僅在損傷后12h可以檢測到。(4)在pH4-7膠條上，與手術(shù)對照組比較，損傷組中有1個蛋白質(zhì)點在兩個或以上時間點未檢測到；1個蛋白質(zhì)點在損傷后4h、12h、24h、48h未檢測到；1個蛋白質(zhì)點僅在損傷后8h未檢測到；1個蛋白質(zhì)點僅在損傷后48h未檢測到。與手術(shù)對照組比較，損傷組中有3個蛋白質(zhì)點在兩個或以上時間點可以檢測到；1

7、個蛋白質(zhì)點在損傷后24h、48h可以檢測到；2個蛋白質(zhì)點在損傷后12h、24h、48h可以檢測到；1個蛋白質(zhì)點僅在損傷后4h可以檢測到；3個蛋白質(zhì)點僅在損傷后8h可以檢測到；4個蛋白質(zhì)點僅在損傷后12h可以檢測到；1個蛋白質(zhì)點僅在損傷后48h可以檢測到。(5)在pH3-10膠條上，與手術(shù)對照組比較，損傷后共有34個蛋白質(zhì)點表達增高；有31個蛋白質(zhì)點表達降低；其中損傷組中有6個蛋白質(zhì)點在兩個或以上時間點表達增高；1個蛋白質(zhì)點在損傷后8h、

8、12h表達增高；1個蛋白質(zhì)點在損傷后8h、24h表達增高；1個蛋白質(zhì)點在損傷后12h、24h表達增高；1個蛋白質(zhì)點在損傷后24h、48h表達增高；1個蛋白質(zhì)點在損傷后4h、8h、12h表達增高；1個蛋白質(zhì)點在損傷后4h、8h、12h、24h、48h表達增高；1個蛋白質(zhì)點僅在損傷后4h表達增高；3個蛋白質(zhì)點僅在損傷后8h表達增高；11個蛋白質(zhì)點僅在損傷后12h表達增高；1個蛋白質(zhì)點僅在損傷后24h表達增高；2個蛋白質(zhì)點僅在損傷后48h表達

9、增高；其中損傷組中有5個蛋白質(zhì)點在兩個或以上時間點表達降低；1個蛋白質(zhì)點在損傷后8h、12h表達降低；2個蛋白質(zhì)點在損傷后12h、48h表達降低；1個蛋白質(zhì)點在損傷后4h、8h、24h表達降低；1個蛋白質(zhì)點在損傷后8h、12h、48h表達降低；13個蛋白質(zhì)點僅在損傷后8h表達降低；2個蛋白質(zhì)點僅在損傷后12h表達降低；1個蛋白質(zhì)點僅在損傷后24h表達降低；3個蛋白質(zhì)點僅在損傷后48h表達降低。(6)在pH4-7膠條上，與手術(shù)對照組比較，

10、損傷后共有36個蛋白質(zhì)點表達增高；有8個蛋白質(zhì)點表達降低；其中損傷組中有8個蛋白質(zhì)點在兩個或以上時間點表達增高；1個蛋白質(zhì)點在損傷后8h、12h表達增高；2個蛋白質(zhì)點在損傷后12h、24h表達增高；2個蛋白質(zhì)點在損傷后4h、8h、12h表達增高；2個蛋白質(zhì)點在損傷后12h、24h、48h表達增高；1個蛋白質(zhì)點在損傷后4h、8h、12h、24h、48h表達增高；2個蛋白質(zhì)點僅在損傷后8h表達增高；5個蛋白質(zhì)點僅在損傷后12h表達增高；1個

11、蛋白質(zhì)點僅在損傷后24h表達增高；5個蛋白質(zhì)點僅在損傷后48h表達增高；其中1個蛋白質(zhì)點僅在損傷后4h表達降低；4個蛋白質(zhì)點僅在損傷后12h表達降低；1個蛋白質(zhì)點僅在損傷后24h表達降低；2個蛋白質(zhì)點僅在損傷后48h表達降低。 結(jié)論：1體外培養(yǎng)神經(jīng)細胞液壓沖擊裝置可復(fù)制分級損傷模型，沖擊力定量準確，重復(fù)性好，復(fù)制的模型可用于腦損傷的神經(jīng)病理和分子機制研究。 2腦損傷可引起海馬組織蛋白質(zhì)組發(fā)生變化。 3在海馬中各個