機械應力誘導血管重建的差異蛋白質組學研究.pdf

1、本文探討了機械應力誘導血管重建的分子機制，對于深入了解心血管活動和疾病發(fā)生的本質以及心血管疾病的防治都具有重要的理論和臨床意義。 方法：①以自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)為高血壓動物模型、Wistar-Kyoto大鼠(WKY)為正常對照，進行雙向凝膠電泳(2-DE)、質譜分析(MS)和生物信息學分析聯(lián)用的差異蛋白質組學分析；②應用血管應力培養(yǎng)模型，分別在正常切應力(15dyn/cm<'2>)和低切應力(5 dyn/cm<'2>)條件

2、下離體培養(yǎng)大鼠胸主動脈；⑧應用血管差異蛋白質組學方法，分析正常切應力和低切應力條件下培養(yǎng)血管的蛋白質譜差異；④對MS鑒定的感興趣蛋白質Rho-GDI alpha，進一步應用Western blotting和Real-time PCR技術驗證2-DE顯示的Rho-GDI alpha在不同切應力條件下培養(yǎng)動脈表達水平的變化；⑤應用RNA干擾(RNAi)技術抑制培養(yǎng)VSMCs的Rho-GDI alpha表達，并應用Transwell法、流式細

3、胞儀技術和免疫熒光結合激光共聚焦顯微鏡檢測抑制Rho-GDI alpha表達后VSMCs的遷移能力、凋亡細胞比例和細胞骨架、粘著斑形成情況。 結果：①2-DE圖譜比對分析顯示，18周齡SHR和同周齡WKY之間共有50個表達水平有差異的蛋白質點，其中有18個點在6周齡WKY和SHR之間的變化趨勢與18周齡WKY和SHR之間的變化趨勢一致；其余32個差異表達的蛋白質點作為質譜分析的候選蛋白點(19個點在SHR高表達，13個點在WKY

4、高表達)；②低切應力條件下體外培養(yǎng)大鼠胸主動脈的差異蛋白質組學分析顯示，正常切應力組和低切應力組培養(yǎng)血管共有78個差異表達的蛋A質點，其中Rho-GDI alpha、actin、transgelin和receptor activity modifying protein 2得到MADIL-TOF MS鑒定；③Western blotting和Real-timePCR結果顯示，Rho-GDI alpha蛋A質和mRNA表達水平在正常切應力

5、組均高于低切應力組，差異有顯著性(P<0.05)；④RNAi抑制培養(yǎng)VSMCs Rho-GDI alpha表達后，VSMCs遷移能力和凋亡比例均顯著增加(P<0.05)；⑤抑制培養(yǎng)VSMCs Rho-GDI alpha表達，能促進VSMCs F-actin束狀排列的形成和粘著斑paxillin的聚集。 結論：①在6周齡WKY和SHR之間變化趨勢與18周齡WKY和SHR之間變化趨勢一致的18個蛋白質點可能與大鼠種系之間的遺傳差異有

6、關，其余32個差異表達的蛋白質可能參與了高血壓誘導的血管重建；②正常切應力和低切應力培養(yǎng)血管共有78個差異表達的蛋白質點，其中Rho-GDI alpha在低切應力條件下培養(yǎng)血管的表達水平被明顯抑制；③VSMCs Rho-GDI alpha表達被抑制后，VSMCs遷移能力和凋亡比例均顯著增加，同時促進了細胞骨架形成和粘著斑聚集。結果提示，低切應力可能通過抑制Rho-GDI alpha在VSMCs的表達，促進VSMCs遷移和凋亡，從而誘導血