綠茶通過(guò)調(diào)控肺組織微環(huán)境實(shí)現(xiàn)大鼠肺癌預(yù)防作用的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：目前肺癌已成為全球發(fā)病率、病死率最高的惡性腫瘤。近年來(lái)，盡管肺癌綜合治療技術(shù)不斷發(fā)展，但其總體療效卻仍然很不理想。人們轉(zhuǎn)而注重肺癌的預(yù)防，希望通過(guò)化學(xué)預(yù)防策略降低肺癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。綠茶為美國(guó)國(guó)立癌癥研究所推薦的有效化學(xué)預(yù)防策略之一。在前期研究中，課題組采用苯并芘油劑大鼠肺內(nèi)注射成功構(gòu)建了大鼠原發(fā)肺腫瘤模型，發(fā)現(xiàn)飲用1％的綠茶能使苯并芘所致的大鼠原發(fā)肺腫瘤發(fā)生率從70％下降至30％，并且綠茶對(duì)經(jīng)苯并芘油劑肺內(nèi)注射處理后大鼠肺組織微環(huán)境

2、中的粘膜上皮細(xì)胞、粘膜下細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞以及肺間質(zhì)細(xì)胞等的基因表達(dá)具有明顯的調(diào)節(jié)作用，提示綠茶很可能在支氣管/肺泡上皮細(xì)胞因DNA受損而進(jìn)入癌變的過(guò)程中，通過(guò)調(diào)節(jié)異常上皮周圍的肺組織微環(huán)境，增強(qiáng)肺組織微環(huán)境對(duì)異常上皮細(xì)胞的抑制、甚至逆轉(zhuǎn)作用，來(lái)實(shí)現(xiàn)延緩或阻斷肺癌的發(fā)生。 方法：實(shí)驗(yàn)第一部分，將80只SD大鼠隨機(jī)分為兩組。A組40只大鼠接受3，4.苯并芘.玉米油肺內(nèi)注射，而B(niǎo)組大鼠僅接受玉米油肺內(nèi)注射。兩組大鼠均接受每

3、2周一次，一共4次肺內(nèi)注射。在首次注射32周后處死所有大鼠，將A組中發(fā)生肺腫瘤的大鼠分入CA亞組，而未生成肺腫瘤的大鼠分入NON-CA亞組。提取NON-CA組大鼠3，4-苯并芘.玉米油肺內(nèi)注射部位周圍肺組織，以及CA組大鼠肺腫瘤旁肺組織的總蛋白，經(jīng)丙酮純化后，配對(duì)進(jìn)行雙向凝膠電泳分離，獲得NON-CA/CA組肺組織微環(huán)境總蛋白2-DE圖譜，并分析獲得差異表達(dá)蛋白質(zhì)點(diǎn)，即肺癌發(fā)生過(guò)程中，大鼠肺組織微環(huán)境防癌作用相關(guān)蛋白質(zhì)點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)第二部分，

4、將60只SD大鼠隨機(jī)分為兩組。TEA組30只大鼠接受綠茶干預(yù)，而WATER組30只大鼠接受水為飲料的對(duì)照干預(yù)。所有大鼠均接受如前所述的3，4-苯并芘.玉米油肺內(nèi)注射，每2周一次，一共4次。分別于首次注射后的第4周、第8周、第16周處死兩組大鼠各9只。提取TEA組和WATER組大鼠3，4-苯并芘.玉米油肺內(nèi)注射部位周圍肺組織的總蛋白，經(jīng)丙酮純化后，配對(duì)進(jìn)行雙向凝膠電泳分離，獲得TEA-4w/WATER-4w組、TEA-8w/WATER-8

5、w組、TEA-16w/WATER-16w組肺組織微環(huán)境總蛋白2-DE圖譜，并分析獲得差異表達(dá)蛋白質(zhì)點(diǎn)，即肺癌發(fā)生過(guò)程中，不同時(shí)段綠茶調(diào)控的肺組織微環(huán)境敏感蛋白質(zhì)點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)第三部分，將前兩部分所獲得的差異表達(dá)蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行綜合分析，篩選兩部分共同存在的差異表達(dá)蛋白質(zhì)點(diǎn)，通過(guò)質(zhì)譜分析及生物信息學(xué)研究鑒定這些蛋白質(zhì)點(diǎn)所代表的蛋白質(zhì)，即綠茶調(diào)控大鼠肺組織微環(huán)境實(shí)現(xiàn)肺癌預(yù)防作用的功能蛋白質(zhì)。 結(jié)果：成功構(gòu)建SD大鼠原發(fā)肺腫瘤模型。成功提取NO

6、N-CA組大鼠3，4-苯并芘.玉米油肺內(nèi)注射部位周圍肺組織，以及CA組大鼠肺腫瘤旁肺組織的總蛋白。雙向凝膠電泳分離后，經(jīng)考染顯色獲得背景清晰，分辨率高，重復(fù)性好的2-DE圖譜。使用PDQuest軟件對(duì)凝膠圖譜進(jìn)行圖像分析及成組比較，NON-CA/CA組有9個(gè)點(diǎn)上調(diào)(包括2、4、6、8、9點(diǎn)，見(jiàn)圖1-7)，11個(gè)點(diǎn)下調(diào)(包括1、3、5、7點(diǎn)，見(jiàn)圖1-7)。成功提取TEA-4w組、WATER-4w組，TEA-8w組、WATER-8w組，TE

7、A-16w組、WATER-16w組大鼠3，4-苯并芘-玉米油肺內(nèi)注射部位周圍肺組織的總蛋白。雙向凝膠電泳分離后，經(jīng)考染顯色獲得背景清晰，分辨率高，重復(fù)性好的2-DE圖譜。使用PDQuest軟件對(duì)凝膠圖譜進(jìn)行圖像分析及成組比較，TEA-4w/WATER-4w組，TEA-8w/WATER-8w組，TEA-16w/WATER-16w組共有的表達(dá)上調(diào)點(diǎn)有8個(gè)(包括2、4、6、8、9點(diǎn)，見(jiàn)圖2-7，2-8，2-9)，而共有的表達(dá)下調(diào)點(diǎn)有7個(gè)(包括

8、1、3、5、7點(diǎn)，見(jiàn)圖2-7，2-8，2-9)。綜合前兩部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分析獲取9個(gè)共同的表達(dá)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)，經(jīng)質(zhì)譜分析及生物信息學(xué)研究鑒定有8個(gè)蛋白得到鑒定，1個(gè)蛋白可疑。8個(gè)得到鑒定的差異表達(dá)蛋白質(zhì)分別為：DJ-1，CapZ alpha-2，CK-7，LRRGT00191，GDI-2，EF-1-alpha，Guanase，以及GST A3。 結(jié)論：利用3，4.苯并芘.玉米油混合液經(jīng)皮肺內(nèi)注射可成功構(gòu)建大鼠原發(fā)肺腫瘤模型。綠茶在3