野百合堿致大鼠肺動(dòng)脈高壓模型的肺組織差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的： 1.觀察正常組與野百合堿致肺動(dòng)脈高壓組大鼠肺組織差異蛋白質(zhì)組學(xué)的變化,在蛋白質(zhì)組學(xué)水平探討肺動(dòng)脈高壓形成機(jī)制. 2.通過(guò)觀察葛根素干預(yù)組與野百合堿致肺動(dòng)脈高壓組大鼠肺組織差異蛋白質(zhì)組學(xué)的變化,在蛋白質(zhì)組學(xué)水平探討葛根素抑制肺動(dòng)脈高壓形成、肺血管重建的作用機(jī)制. 方法： 1.制備野百合堿致大鼠肺動(dòng)脈高壓模型.雄性二級(jí)Sprague-Dawley(SD)大鼠,50只隨機(jī)均勻分5組,每組10只.分為正常

2、組(N組);溶劑對(duì)照組(C組);野百合堿腹腔注射2周組(M2組):野百合堿腹腔注射3周組(M3組):野百合堿腹腔注射3周加中藥葛根素組(M3P組).N組正常環(huán)境下飼養(yǎng)3周.C組乙醇生理鹽水混合溶液腹腔內(nèi)注射一次,劑量為50mg/kg體重,飼養(yǎng)三周.M2,M3組:野百合堿溶液腹腔內(nèi)注射一次,劑量為50mg/kg體重,分別飼養(yǎng)二周和三周.M3P組:野百合堿注射劑量同C組.在注射野百合堿溶液后每晨以40mg/kg體重劑量腹腔注射一次,飼養(yǎng)三周

3、. 2.測(cè)定平均肺動(dòng)脈壓力(mPAP)、平均頸動(dòng)脈壓力(mCAP)、右心室重量比RV/(Lv+S)﹪、平均右心室壓力(mRVP),制作光鏡標(biāo)本、測(cè)量肺血管重建指標(biāo)(肺細(xì)小動(dòng)脈中膜厚度PAMT)及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析. 3.對(duì)各組肺組織提出的總蛋白質(zhì)進(jìn)行雙向電泳,染色獲得凝膠圖,圖像分析(系統(tǒng)自動(dòng)設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)上調(diào)2倍以上及下降1/2以下的為顯著差異點(diǎn)). 4.基質(zhì)輔助激光解析-飛行時(shí)問(wèn)質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)鑒定蛋白質(zhì)

4、及NCBInr數(shù)據(jù)庫(kù)檢索. 5.對(duì)鑒定的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析. 結(jié)果： 1.N組與C組比較,mPAP、mRVP、RV/(LV+S)﹪、F'AMT的p值>0.05,表明兩組無(wú)顯著差異. 2.M3組、N組、C組mPAP分別為26.04±5.03、12.93±1.93、13.93±2.18,M3組與N組、C組比較,具有高度顯著性差異(p<0.01);M3組、N組、C組RV/(LV+S)﹪分別為59.52±12.86、

5、22.55±2.59、23.33±2.90,M3組與N組、C組比較,具有高度顯著性差異(p

6、差異(p>0.05).表明肺動(dòng)脈高壓形成,肺血管結(jié)構(gòu)重建,右室肥大,肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型復(fù)制成功. 3.M3P組、M3組mPAP分別為22.34±3.76、26.04±5.03,M3P組與M3組相比,具有顯著性差異(p<0.05);M3P組、M3組RV/(LV+S)﹪分別為40.32±5.24、59.52±12.86,M3P組與M3組相比,具有高度顯著性差異(p<0.01);M3P組、M3組PAMT分別為26.12±3.40、36

7、.48±3.81,M3P組與M3組相比,具有高度顯著性差異(p<0.01):M3P組、M3組mRVP分別為21.42±2.98、22.17±5.63,M3P組與M3組相比,具有顯著性差異(p<0.05);mCAP二組問(wèn)無(wú)顯著差異(p>0.05).表明葛根素可抑制野百合堿引起的肺動(dòng)脈高壓、肺血管重建與右心室肥大. 4.M2組、M3組mPAP分別為20.58±3.54、26.04±5.03,M2組與M3組比較,具有高度顯著性差異(p

8、<0.01);M2組、M3組RV/(LV+S)﹪分別為29.83±4.07、59.52±12.86, M2組與M3組比較,具有高度顯著性差異(p<0.01);M2組、M3組PAMT分別為27.36±2.02、36.48±3.81,M2組與M3組比較,具有高度顯著性差異(p<0.01);M2組、M3組mRVF分別為18.14±2.47、22.17±5.63,M2組與M3組比較,具有高度顯著性差異(p<0.01);mCAP無(wú)顯著差異(p>0

9、.05).且N組,M2組,M3組的mPAP、mRVP、RV/(LV+S)﹪、PAMT均依次遞增. 5.通過(guò)雙向凝膠電泳、基質(zhì)輔助激光解析-飛行時(shí)間質(zhì)譜鑒定及數(shù)據(jù)庫(kù)檢索發(fā)現(xiàn)1)nPKC ε亞單位、ATP合成酶β亞單位、膜聯(lián)蛋白III、鈣網(wǎng)蛋白前體、波形蛋白、26S蛋白酶體、蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶、蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶A3前體、延伸因子2、肌動(dòng)蛋白β亞單位等10個(gè)蛋白質(zhì)在N組與野百合堿組差異顯著,提示可能與肺動(dòng)脈高壓、肺血管重建、右室肥厚

10、形成有關(guān).其中,鈣網(wǎng)蛋白前體、波形蛋白、26S蛋白酶體、延伸因子2、肌動(dòng)蛋白β亞單位、蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶6個(gè)蛋白質(zhì)在肺動(dòng)脈高壓形成過(guò)程中一直上調(diào);膜聯(lián)蛋白Ⅲ、nPKCε亞單位在肺動(dòng)脈高壓形成過(guò)程中一直下調(diào);ATP合成酶β亞單位、蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶A3前體兩個(gè)蛋白質(zhì)在肺動(dòng)脈高壓形成過(guò)程中,先增高后下降.2)在葛根素組,鈣網(wǎng)蛋白前體、ATP合成酶β亞單位、肌動(dòng)蛋白β亞單位、26S蛋白酶體、延伸因子2發(fā)生顯著性變化,可能與其抑制肺動(dòng)脈高壓有關(guān)

11、.3)特別是,鈣網(wǎng)蛋白前體和126S蛋白酶體兩個(gè)蛋白質(zhì)存正常組表達(dá)幾乎為0,在肺動(dòng)脈高壓組大量表達(dá),而在葛根素干預(yù)組大量下調(diào),幾乎達(dá)到0水平,可能在肺動(dòng)脈高壓形成、肺血管重建過(guò)程及葛根素對(duì)肺動(dòng)脈高壓的治療中意義重大.值得深入研究. 結(jié)論：1.nPKCε亞單位、ATP合成酶β亞單位、膜聯(lián)蛋白Ⅲ、鈣網(wǎng)蛋白前體、波形蛋白、26S蛋白酶體、蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶、蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶A3前體、延伸因子2、肌動(dòng)蛋白β亞單位等10個(gè)蛋白質(zhì)可能與肺