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文檔簡介
1、目的:研究EGCG、Taurine和Genistein組成的雞尾酒作用肝纖維化大鼠后,分析和鑒定肝組織中差異表達的蛋白質(zhì),探討雞尾酒療法抗肝纖維化作用的蛋白質(zhì)基礎(chǔ)及分子機制,以期為肝纖維化的診斷、治療和預(yù)后尋找可靠的生物標志物并為下一步實驗奠定基礎(chǔ)。
方法:(1)以CCL4誘導大鼠肝纖維化模型,在造模成功后給予雞尾酒藥物治療,分為中劑量組(?;撬?00mg/kg+EGCG15mg/kg+三羥基異黃酮10mg/kg)和高劑量組(
2、牛磺酸200mg/kg+EGCG30mg/kg+三羥基異黃酮20mg/kg),用藥六周末,處死大鼠,取大鼠肝組織。(2)選取肝右葉相同部位組織經(jīng)10%甲醛固定,蠟塊包埋,HE染色,光學顯微鏡下應(yīng)用DMR+Q550圖像分析儀進行病理學觀察;(3)提取肝組織蛋白,采用同位素iTRAQ試劑標記CCL4模型組及雞尾酒的中、高劑量組的肝組織全蛋白,經(jīng)SCX分離和LC-ESI-MS/MS分析后,將得到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進行蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫搜索鑒定差異表達的蛋白
3、,利用生物信息學方法對差異蛋白進行分析。
結(jié)果:(1)病理結(jié)果顯示雞尾酒療法各劑量組大鼠肝纖維程度均有不同程度的減輕,肝小葉結(jié)構(gòu)基本完整;(2)以變化倍數(shù)大于1.5倍或者小于0.67倍的蛋白為差異表達蛋白的標準,與CCl4模型組相比,雞尾酒組共鑒定到192種差異蛋白質(zhì),其中雞尾酒中劑量組共發(fā)現(xiàn)135個差異表達的蛋白質(zhì),55個下調(diào),80個上調(diào);雞尾酒高劑量組共發(fā)現(xiàn)125個差異表達的蛋白質(zhì),36個下調(diào),89個上調(diào)。在兩個給藥劑量組
4、與CCl4模型組的比值中上、下調(diào)一致的差異蛋白共68個,同時上調(diào)的蛋白46個,同時下調(diào)的蛋白22個。通過對這些差異蛋白分別進行GO、pathway和蛋白互作分析發(fā)現(xiàn)其參與翻譯后修飾、轉(zhuǎn)錄、重組和信號傳導通路等過程。
結(jié)論:?;撬?、EGCG和三羥基異黃酮組成的雞尾酒藥物作用肝纖維化的SD大鼠后,大鼠肝組織中參與重要生物信號途徑的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶、Ras相關(guān)蛋白、VitA結(jié)合蛋白、細胞色素P450、組織蛋白酶D、L蛋白等蛋白
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