W198作用機(jī)理的定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、為了研究國家I類抗癌新藥5-溴粉防己堿(W198)的作用機(jī)理，本研究從定量蛋白質(zhì)組學(xué)的角度，采用18O標(biāo)記法，動態(tài)、整體、定量地考察了人慢性髓系白血病K562細(xì)胞在W198作用后多種蛋白質(zhì)表達(dá)發(fā)生的變化，分別以正常K562細(xì)胞和粉防己堿(Tet)作用后的K562細(xì)胞為參照，找出W198作用K562細(xì)胞后表達(dá)量發(fā)生變化的差異蛋白。利用生物學(xué)相關(guān)知識，從差異蛋白的功能角度初步闡述了W198的作用機(jī)理并為進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下：

2、 通過W198對K562細(xì)胞生長抑制的研究發(fā)現(xiàn)，W198對K562細(xì)胞生長的抑制作用具有明顯的濃度依賴性。確定了作用濃度1.5mg/L，作用時間大于18h的研究條件。 經(jīng)過優(yōu)化和評估認(rèn)為，18O標(biāo)記法是一種可信的定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法，可以用于W198作用K562細(xì)胞所提取的水溶性總蛋白樣品的應(yīng)用研究。0.5-2.0這個范圍作為蛋白表達(dá)量未發(fā)生變化的標(biāo)準(zhǔn)具有可信性，即蛋白質(zhì)表達(dá)量0.5以下，或都在2.0以上之外時，才認(rèn)為該

3、蛋白為差異蛋白。 在所鑒定得到的155個可信蛋白中，以正常K562細(xì)胞為參照，W198作用后的K562細(xì)胞共有16個蛋白表達(dá)量發(fā)生變化，其中8個上調(diào)，包括高遷移率蛋白B2，抗氧化蛋白-2，真核起始因子4A-I等：8個下調(diào)，包括TCP-1，GRP94，GST-π，S-甲酸基谷胱苷肽水解酶，泛素結(jié)合酶E2 L3等。以Tet作用后的K562細(xì)胞為參照，W198作用后的K562細(xì)胞共有8個蛋白表達(dá)量發(fā)生變化，其中5個上調(diào)，包括熱休克蛋白