實時組織彈性成像評價大鼠肝纖維化的實驗研究.pdf

1、研究目的：
　　評價實時組織彈性成像(real-time tissue elastography, RTE)技術(shù)對四氯化碳(Carbon Tetrachloride，CCl4)誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型的診斷價值。
　　研究方法：
　　首先建立大鼠肝纖維化模型:將65只清潔級雄性SD大鼠隨機分為對照組（8只）和模型組（57只）。模型組每周3次按3 ml/kg劑量的50％CCl4聯(lián)合50％山茶油經(jīng)背部皮下注射，共8周，首次按6

2、ml/kg劑量注射。對照組每周3次以3ml/kg生理鹽水行背部皮下注射，共8周，首次按6ml/kg劑量注射。
　　分別于給藥的第1、4、6、8周末時，從對照組中隨機選取2只，模型組中隨機選取13～14只大鼠，對其肝臟進(jìn)行常規(guī)灰階超聲(two-dimensional ultrasonicimaging，2D-US)檢查及RTE檢查，記錄2D-US評分和RTE評分。
　　所有實驗大鼠在超聲檢查結(jié)束后進(jìn)行心臟取血檢測肝功能指標(biāo)，包

3、括丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase，ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase，AST)、白蛋白(albumin，ALB)。隨后處死大鼠，取部分肝臟組織以10％甲醛固定并制成蠟塊，進(jìn)行HE染色和網(wǎng)狀纖維染色，光鏡下觀察肝臟組織病理學(xué)改變并進(jìn)行分期。取部分肝組織以2.5％戊二醛固定，常規(guī)電鏡包埋，超薄切片，鉛鈾雙染，透射電鏡下觀察肝組織超微結(jié)構(gòu)。
　　以病理分期為依據(jù)對大

4、鼠進(jìn)行分組，采用單因素方差分析對不同肝纖維化分期的肝功能指標(biāo)、2D-US評分結(jié)果進(jìn)行比較;肝纖維化分期和RTE評分進(jìn)行Spearman等級相關(guān)分析;以病理學(xué)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，分別計算RTE和2D-US診斷肝纖維化的敏感性、準(zhǔn)確性和特異性，用卡方檢驗比較兩組診斷肝纖維化的準(zhǔn)確性、敏感性;以病理結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，構(gòu)建受試者工作特征(Receive operating characteristic，ROC)曲線，探討RTE對大鼠肝纖維化的診斷價值。P＜0

5、.05時，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　研究結(jié)果：
　　對照組中，8只大鼠全部成活，光鏡下肝小葉結(jié)構(gòu)正常，無肝細(xì)胞變性壞死，無纖維分隔形成;模型組中，死亡4只大鼠（第4周和第7周各死亡1只、第8周死亡2只），隨著給藥時間的延長，肝細(xì)胞發(fā)生變性壞死，逐漸形成纖維間隔和肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，最終假小葉形成。電鏡下內(nèi)皮細(xì)胞增生，細(xì)胞器增多，內(nèi)皮細(xì)胞間窗孔減少甚至消失，內(nèi)皮下基底膜形成，周圍出現(xiàn)大量膠原纖維等。61只大鼠病理肝纖維化分期結(jié)果為S

6、0期12只，S1期12只，S2期14只，S3期12只，S4期11只。血清中ALT、AST水平隨著肝纖維化加重呈上升趨勢，ALB水平隨著肝纖維化加重呈下降趨勢，ALT、AST、ALB組間兩兩比較:S0、S1期ALT、AST差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），S3、S4期ALB差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，其余各組間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。2D-US評分隨著肝纖維化加重呈上升趨勢，2D-US評分組間兩兩比較:S0、S1期差

7、異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，其余各組間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。2D-US診斷大鼠肝纖維化的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性分別為67.3％、75.0％、68.8％，RTE診斷大鼠肝纖維化的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性分別為89.8％、66.7％、85.3％。RTE與2D-US診斷肝纖維化準(zhǔn)確性、敏感性間的比較，均有有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=4.64，P＜0.05; x2=7.33，P＜0.05)。RTE評分與肝纖維化程度呈顯著正相關(guān)(r=0

8、.842，P＜0.01)。以病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，RTE診斷為結(jié)果值，獲得的ROC曲線下面積(Area under the ROC curve，AUC)為0.953（95％可信區(qū)間為0.877～1.029），標(biāo)準(zhǔn)誤為0.039，RTE用于定性診斷大鼠肝纖維化具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　肝纖維化的RTE評分與肝纖維化的病理分期有很好的相關(guān)性，RTE為無創(chuàng)性肝纖維化診斷提供了一種新的診斷方法，具有獨特的優(yōu)勢和廣