IBD疾病特異與療效監(jiān)測血清標(biāo)志物的蛋白質(zhì)組學(xué)篩選初探.pdf

1、目的：
　　炎性腸?。↖nflammatory Bowel Disease，IBD）是一種慢性腸道炎癥性疾病，包括克羅恩病(Crohn's Disease，CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis，UC)，臨床表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作的腹痛、腹瀉、粘液血便等，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。目前臨床上尚無廣泛使用且高效的疾病診斷的血清標(biāo)記物。糖皮質(zhì)激素（簡稱激素）通常能夠顯著抑制炎癥，迅速緩解癥狀，但因其不良反應(yīng)及其無法維持疾病緩解

2、，故難以長期使用。同時(shí)部分患者存在激素依賴或激素抵抗，因而尋找激素療效預(yù)測指標(biāo)有著重大的臨床意義。近年來，應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法尋找臨床標(biāo)志物已經(jīng)成為蛋白質(zhì)組學(xué)的核心應(yīng)用之一。2014年李智立教授課題組使用Native-PAGE、SDS-PAGE和MALDI-FTICR MS方法發(fā)現(xiàn)并證實(shí)了新型循環(huán)免疫炎癥相關(guān)蛋白復(fù)合物（Immunoinflammation-Related Protein Complexes，IIRPCs）能夠作為診斷癌癥

3、的個(gè)體化生物標(biāo)志物。本研究擬在以上研究的基礎(chǔ)上，使用Native-PAGE、SDS-PAGE和MALDI-FTICR MS方法尋找IBD特異的血清蛋白標(biāo)志物，幫助疾病診斷，并通過對(duì)比激素治療前后IBD患者血清蛋白差異，尋找IBD激素治療敏感性和療效預(yù)測指標(biāo)。
　　第一部分 IBD疾病特異血清蛋白標(biāo)志物的蛋白質(zhì)組學(xué)篩選
　　方法:對(duì)65例健康對(duì)照、57例結(jié)直腸癌、69例UC和67例CD患者血清行Native-PAGE，基于II

4、RPCs對(duì)患者血清進(jìn)行分類，使用Quantity One軟件對(duì)IIRPCs進(jìn)行定量。使用SDS-PAGE對(duì)IIRPCs進(jìn)一步分離，并用質(zhì)譜鑒定IIRPCs包含的主要蛋白種類。
　　結(jié)果:根據(jù)血清IIRPCs的條帶數(shù)目和位置，所有樣本可分為a、b、c和其他類型，以a、b型較為常見。其中a型包括a1、a2、a3、a4，4個(gè)IIRPCs，b型包括b1、b2、b3、b4、b5，5個(gè)IIRPCs，c型為空白型，不含IIRPCs。UC、CD和

5、結(jié)直腸癌患者IIRPCs水平較健康人明顯升高(p＜0.05)，且IBD患者IIRPCs水平高于結(jié)直腸癌患者(a2、a3、a4、b3、b4，p＜0.05)，而UC與CD患者間IIRPCs水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。活動(dòng)期UC患者血清IIRPCs水平高于緩解期患者(中度活動(dòng)期b2、b4、b5，p＜0.05;重度活動(dòng)期a3、b2、b5，p＜0.05)?；顒?dòng)期CD患者血清IIRPCs水平較緩解期升高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。a3與

6、ESR Pearson相關(guān)系數(shù)0.576，p值＜0.001;a3與hsCRP Pearson相關(guān)系數(shù)0.392，p=0.020;b4與ESR Pearson相關(guān)系數(shù)0.426，p=0.027; b4與hsCRP Pearson相關(guān)系數(shù)0.375，p=0.054。初步質(zhì)譜鑒定結(jié)果表明，血清IIRPCs的主要組分為IgG1、IgA1、觸珠蛋白、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4A、補(bǔ)體因子H等。
　　結(jié)論:
　　1.可利用簡單的Native-P

7、AGE方法，分離疾病相關(guān)的血清IIRPCs。并基于血清IIRPCs的類型，IBD樣本可分為四類:類型a、b、c和其他類型，以a、b型較為常見。
　　2.血清IIRPCs的主要組分為IgG1、IgA1、觸珠蛋白、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4A、補(bǔ)體因子H等。這些蛋白質(zhì)是一些與免疫系統(tǒng)、炎癥系統(tǒng)和補(bǔ)體系統(tǒng)相關(guān)的蛋白質(zhì)。
　　3.UC、CD患者IIRPCs水平較健康人明顯升高，IIRPCs對(duì)于IBD的診斷具有極高的靈敏度?；顒?dòng)期UC、CD患

8、者IIRPCs水平較緩解期升高，提示IIRPCs水平可作為疾病活動(dòng)度評(píng)估指標(biāo)且與臨床常用炎癥指標(biāo)如血沉、超敏C反應(yīng)蛋白具有一定的正相關(guān)性。
　　4.IBD患者IIRPCs水平高于結(jié)直腸癌患者。IIRPCs對(duì)于IBD和結(jié)直腸癌有一定的鑒別診斷能力，但無法鑒別UC和CD患者。
　　第二部分 IBD激素療效預(yù)測血清蛋白標(biāo)志物的蛋白質(zhì)組學(xué)篩選
　　方法:對(duì)45組IBD患者激素治療前后的血清標(biāo)本行Native-PAGE，對(duì)比激素

9、治療前后血清蛋白差異，結(jié)合臨床資料分析激素療效預(yù)測指標(biāo)。
　　結(jié)果:與治療前相比，激素治療第1天、第7天、第14天血清IIRPCs濃度變化趨勢基本一致，且每種血清類型各條帶濃度變化趨勢基本一致。根據(jù)IIRPCs濃度變化趨勢分為上升趨勢組和下降趨勢組，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，上升趨勢組和下降趨勢組IIRPCs水平均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。結(jié)合臨床資料分析表明，上升趨勢組和下降趨勢組治療前HGB水平和治療前IIRPCs水平(a4、b5