生物標(biāo)志物的高靈敏檢測新方法研究.pdf

1、在臨床檢驗中，生物標(biāo)志物的檢測日益受到檢驗醫(yī)師和研究者的關(guān)注，成為近年來研究的熱點。本課題建立了測定腫瘤標(biāo)志物神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)全新的免疫學(xué)檢測新方法和乙醇代謝產(chǎn)物乙基葡萄糖醛酸苷的氣相色譜-質(zhì)譜檢測新技術(shù)。主要研究內(nèi)容可分為以下兩部分：
　　1.基于功能化單壁碳納米管和金納米探針的免疫傳感器檢測血清中神經(jīng)元特異性烯醇化酶
　　本研究設(shè)計了一種基于NSE功能化單壁碳納米管的電化學(xué)免疫傳感器用來檢測小細胞肺癌標(biāo)志物

2、神經(jīng)元特異性烯醇化酶。功能化的單壁碳納米管不僅增加了電極表面的信號傳遞，同時也提供了大的比表面積，提供了使更多量的抗原固定位點以便免疫反應(yīng)中抗體的識別。加入了金納米粒子標(biāo)記的堿性磷酸酶標(biāo)二抗探針(AP-anti-IgG/AuNPs)，探針中的堿性磷酸酶催化底物產(chǎn)生還原反應(yīng)，明顯的放大了電化學(xué)信號。基于單壁碳納米管和金納米探針的雙信號放大作用，該傳感器的最低檢出限為0.033 ng/mL，線性范圍在0.1-2μg/mL之間，具有良好的精密

3、度和回收率，可直接定量檢測復(fù)雜血清中的靶蛋白。所構(gòu)建的傳感器突破了片面追求超高的靈敏度的檢測方法，在保持高靈敏的同時也增大了檢測的線性范圍，可對臨床樣本中高濃度的標(biāo)志物進行直接檢測。為了驗證方法的實用性，將此方法的檢測結(jié)果與臨床實驗室常用的化學(xué)發(fā)光法比較發(fā)現(xiàn)這兩種方法有很好的相關(guān)性和重復(fù)性，這充分說明該方法在臨床應(yīng)用中有一定的潛力。
　　2.生物檢材中乙醇代謝產(chǎn)物乙基葡萄糖醛酸苷的氣相色譜質(zhì)譜檢測
　　在臨床檢驗診斷和法醫(yī)鑒

4、定中判斷近期酒精的攝入情況主要是通過測定患者血液、尿液或呼氣中乙醇的濃度，但這種方法并不夠準(zhǔn)確，也存在著巨大的弊端，主要原因是乙醇在體內(nèi)代謝較快(0.1g/kg/h)，尤其是長期大量飲酒的患者代謝速率更快，飲酒后數(shù)小時血液中的乙醇便不能再被檢出，因此無法準(zhǔn)確判斷乙醇的飲用情況。
　　EtG是乙醇非氧化代謝途徑的直接代謝產(chǎn)物，是乙醇在尿苷二磷酸葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶的作用下與體內(nèi)具有活性的葡萄糖結(jié)合而生成的。乙醇在體內(nèi)消除后8小時EtG仍

5、然可以在血液中檢測到，消除后3-5天仍然可以在尿液中檢測到，因此EtG可以作為一個乙醇代謝的直接標(biāo)志物用于法醫(yī)鑒定中判斷酒后駕駛和臨床檢驗中診斷慢性酒精性疾病。高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS)是目前檢測的EtG一種方法，本研究將氣相色譜質(zhì)譜技術(shù)與固相萃取技術(shù)相結(jié)合，創(chuàng)建了一種更為簡單、實用、廉價、高靈敏的氣相色譜-質(zhì)譜檢測體液中乙基葡萄糖醛酸苷的新方法，該方法在100-3200 ng/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9