宮頸癌篩查新方法及標(biāo)志物的臨床應(yīng)用價值初探.pdf

1、目的:
　　評價葉酸受體介導(dǎo)上皮特殊染色液、腫瘤細(xì)胞周期和表達(dá)相關(guān)蛋白和HPV E6/E7 mRNA分型檢測在宮頸癌篩查中的應(yīng)用價值，明確葉酸受體、腫瘤細(xì)胞周期和表達(dá)相關(guān)蛋白在宮頸病變組織和宮頸脫落細(xì)胞中的表達(dá)。
　　方法:
　　1、對231例門診欲行宮頸癌篩查者，前瞻性行液基細(xì)胞學(xué)檢查(TCT)、人乳頭瘤病毒檢測(HPV)和葉酸受體介導(dǎo)上皮特殊染色液(FRD)檢查，并以病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，計算并對比TCT、HPV和FR

2、D的敏感度、特異度等診斷價值指標(biāo)。
　　2、通過熒光定量PCR方法，對153例宮頸脫落細(xì)胞行HPV DNA分型、HPVE6/E7 mRNA分型，并分析HPV DNA與E6/E7 mRNA檢測的一致性。以47例病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，計算并對比不同型別HPV DNA陽性者、不同型別HPV E6/E7mRNA陽性者患高級別宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌的相對危險度(OR)。
　　3、通過免疫組織化學(xué)方法，檢測231例病理組織中葉酸受體、腫瘤細(xì)

3、胞周期和表達(dá)相關(guān)蛋白的表達(dá)，并采用熒光定量PCR，檢測宮頸脫落細(xì)胞中葉酸受體、腫瘤細(xì)胞周期和表達(dá)相關(guān)蛋白mRNA的表達(dá);同時，向?qū)m頸癌細(xì)胞株C33A中轉(zhuǎn)染攜帶HPV E6、E7基因的質(zhì)粒，通過Western Blot檢測葉酸受體的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　1、高級別宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌發(fā)生的平均年齡為40.15±8.03歲。FRD診斷敏感度77.53％，特異度55.63％，與TCT相比無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。FRD診斷符合率6

4、4.07％，高于HPV和TCT，有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。FRD使用的小棉簽對宮頸病變的診斷效率較低。與≥ASCUS時診斷TCT異常相比，＞ASCUS時診斷TCT異常的診斷效率更高。HPV檢測對CIN2以上病變的陰性預(yù)測值為100％。HPV定量(HC2)與HPV分型診斷的敏感度和特異度無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。
　　2、HPV16的感染率最高，其次是HPV52、HPV58。HPV E6/E7 mRNA檢測的陽性率與HPV DNA拷貝數(shù)相關(guān)。高危型

5、HPV混合感染和混合低危型HPV感染均不影響HPV E6/E7 mRNA分型檢測。HPV16、18 DNA陽性者發(fā)生CIN2以上病變的風(fēng)險顯著高于其他類型感染。HPV E6/E7 mRNA陽性者發(fā)生CIN2以上病變的風(fēng)險顯著高于單純HPV DNA陽性者。HPV16、18型E6/E7 mRNA陽性者，發(fā)生CIN2以上病變風(fēng)險，顯著高于HPV DNA陽性者和其他型HPV E6/E7 mRNA陽性者。
　　3、葉酸受體、CREPT在組織

6、病理學(xué)診斷的宮頸炎和低級別上皮內(nèi)瘤變中均低表達(dá)，在高級別上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌中高表達(dá)，且有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。葉酸受體、CREPT mRNA在不同程度宮頸病變者的脫落細(xì)胞中無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。瞬時轉(zhuǎn)染HPV E6、E7前后，C33A細(xì)胞中葉酸受體表達(dá)未見變化。
　　結(jié)論:
　　1、FRD診斷敏感度和特異度與TCT相比無顯著統(tǒng)計學(xué)差異，且診斷符合率高于HPV和TCT。HC2與HPV分型診斷的敏感度和特異度無顯著統(tǒng)計學(xué)差異，HPV檢測對

7、CIN2以上病變的陰性預(yù)測值極高。
　　2、HPV E6/E7 mRNA陽性者發(fā)生CIN2以上病變的風(fēng)險顯著高于單純HPVDNA陽性者。HPV16、18型E6/E7 mRNA陽性者，發(fā)生CIN2以上病變風(fēng)險，顯著高于單純HPV DNA陽性者和其他型HPV E6/E7 mRNA陽性者。
　　3、葉酸受體、CREPT在組織病理學(xué)診斷的宮頸炎和低級別宮頸上皮內(nèi)瘤變中低表達(dá)，在高級別宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌中高表達(dá)。葉酸受體、CREP