PFOS和PFOA對(duì)渦蟲脅迫相關(guān)蛋白的基因表達(dá)影響及DNA損傷研究.pdf

1、全氟辛烷磺酸鹽(PFOS)和全氟辛烷磺酸(PFOA)是全氟污染物(PFcs)中的代表,具有疏水防塵作用,自上世紀(jì)50年代,在汽車涂料、紡織、不粘鍋涂層等產(chǎn)品中廣泛使用。全氟化合物毒性被逐漸發(fā)現(xiàn),PFOS和PFOA也被禁用,但它們的毒性作用機(jī)制仍未明確。東亞三角渦蟲(Dugesia japonica)為原始三胚層動(dòng)物,具有強(qiáng)大的再生能力,對(duì)環(huán)境刺激非常敏感,可用于檢測(cè)水體質(zhì)量。本論文以PFOS和PFOA處理渦蟲,探究壓力相關(guān)蛋白的基因表達(dá)

2、量與藥品處理濃度及時(shí)長(zhǎng)的關(guān)系,并對(duì)渦蟲經(jīng)藥物處理后細(xì)胞核DNA損傷情況進(jìn)行初步檢測(cè)。
　　實(shí)驗(yàn)以6個(gè)濃度的PFOS和PFOA溶液分別處理完整渦蟲和再生渦蟲,選擇的壓力相關(guān)蛋白基因功能涉及細(xì)胞抗逆性,神經(jīng)發(fā)育,凋亡,信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等,采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)它們mRNA表達(dá)量的相對(duì)變化。結(jié)果表明,低濃度PFOS和PFOA短時(shí)間處理渦蟲,hsp70和hsp90 mRNA表達(dá)量受到抑制,隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng),表達(dá)量上升,可能為毒性壓力下產(chǎn)生應(yīng)激

3、反應(yīng);在高濃度長(zhǎng)時(shí)間處理組,渦蟲p53基因表達(dá)量上升,渦蟲無法承受藥物毒性進(jìn)入凋亡階段;另外,兩種藥物對(duì)神經(jīng)相關(guān)基因 Xnp影響不大,wnt信號(hào)表達(dá)量受PFOA誘導(dǎo)顯著增加,卻不受PFOS影響。
　　以5個(gè)濃度的PFOS和PFOA處理完整渦蟲和再生渦蟲,Western Blot技術(shù)探究HSP70蛋白的表達(dá)變化,結(jié)果顯示,各濃度PFOS和PFOA溶液處理完整渦蟲不同時(shí)長(zhǎng),都不能使HSP70蛋白表達(dá)量顯著改變,但再生渦蟲HSP70蛋白

4、受藥物誘導(dǎo)表達(dá)量可顯著增加,此結(jié)果與hsp70 mRNA變化趨勢(shì)不一致,可能是藥物對(duì)翻譯過程有抑制作用,隨藥物量的增加,蛋白高表達(dá)抵御毒性傷害,與是否處于再生狀態(tài)有關(guān)。
　　PFOS和PFOA溶液處理渦蟲1 d、4 d、7 d、10 d時(shí),以單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其部分細(xì)胞核DNA損傷情況,以探究這兩種藥物對(duì)細(xì)胞核DNA的毒性作用。結(jié)果顯示,PFOS不能造成渦蟲核DNA損傷,PFOA造成20％左右的受測(cè)細(xì)胞DNA損傷,與處理時(shí)長(zhǎng)無