殺菌蛋白基因的克隆、表達(dá)及DNA改組研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、殺菌/通透性增加蛋白（bactericidal/permeadbility-increasing protein,BPI),簡稱殺菌蛋白,是哺乳動物白細(xì)胞中存在的一種堿性蛋白,它能與革蘭氏陰性菌脂多糖（LPS）結(jié)合,具有中和內(nèi)毒素和殺滅細(xì)菌的作用,在革蘭氏陰性菌感染的治療上有良好的發(fā)展前景.BPI全長約456個氨基酸,其氨基端約200個氨基酸（BPI<,23>）具有完整蛋白的全部生物活性.為獲得重組人BPI（rhBPI)在CHO細(xì)胞中的

2、高水平表達(dá),構(gòu)建出租種以二氫葉酸還原酶基因（dhfr)為篩選標(biāo)記的真核表達(dá)質(zhì)粒.將這些質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染CHO（dhfr)細(xì)胞,經(jīng)過氨甲喋（MTX）加壓篩選,獲得多株穩(wěn)定表達(dá)rhBPI的細(xì)胞株,表達(dá)量最高可達(dá)4μg/ml.比較發(fā)現(xiàn),含EF1-α啟動子的質(zhì)粒與含CMV啟動子的質(zhì)粒表達(dá)效率相似;dhfr的弱化有利于rhBPI的表達(dá).對rhBPI初步純化后進(jìn)行殺菌實(shí)驗(yàn).結(jié)果表明重組蛋白具有與天然蛋白類似的殺菌活性.用PCR方法獲得hBPI<,23>

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