玻璃海鞘營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定及活性物質(zhì)的分離分析.pdf

1、目前，從海洋背囊動(dòng)物海鞘中獲取各種活性物質(zhì)的研究正處于高速發(fā)展階段，但關(guān)于對(duì)玻璃海鞘活性物質(zhì)的研究報(bào)道至今很少。我國(guó)的海鞘資源豐富，特別是山東沿海海域，與國(guó)外相比，海鞘資源不僅沒(méi)有得到有效地開(kāi)發(fā)，反而困擾著漁業(yè)的發(fā)展。本文對(duì)玻璃海鞘的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值進(jìn)行了初步分析，并利用化學(xué)手段分離純化玻璃海鞘提取物，結(jié)合藥理學(xué)方法檢測(cè)其抗氧化及抗腫瘤活性。
　　 通過(guò)對(duì)玻璃海鞘中蛋白質(zhì)、脂肪、氨基酸、脂肪酸等營(yíng)養(yǎng)成分含量的分析評(píng)定了玻璃海鞘的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值

2、；利用乙醇浸提法提取玻璃海鞘浸膏，然后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇對(duì)其進(jìn)行萃取，得到不同極性的萃取物，通過(guò)對(duì)DPPH自由基、脂質(zhì)過(guò)氧化及總抗氧化能力的測(cè)定，對(duì)玻璃海鞘不同極性萃取物的抗氧化能力進(jìn)行了探求；用硅膠柱色譜對(duì)正丁醇萃取物進(jìn)行初步分離，將具有藥理活性的正丁醇組分濃縮，經(jīng)歷多次硅膠柱色譜與凝膠柱色譜分離，得到一系列的組分，采用MTT法和磺酰羅明B蛋白染色等生物活性鑒定方法對(duì)玻璃海鞘組分進(jìn)行了活性跟蹤；對(duì)純度較高的成分進(jìn)行了HPL

3、C檢測(cè)及結(jié)構(gòu)初探，對(duì)細(xì)胞毒性強(qiáng)的組分A8B2C3的抗腫瘤活性作了進(jìn)一步的研究，采用吉姆薩與Hoechst 染色法觀察組分A8B2C3作用小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16F0后細(xì)胞形態(tài)的變化，并探討了組分A8B2C3對(duì)B16F0細(xì)胞周期分布及對(duì)細(xì)胞周期相關(guān)調(diào)控基因表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果顯示，玻璃海鞘中人體必需氨基酸占總氨基酸的比值為42.51％，必需氨基酸和非必需氨基酸的比值為73.94％；多不飽和脂肪酸含量占脂肪酸總量的13.8％；玻璃

4、海鞘中含有豐富的Fe、Zn、Mn、Cu、Ni等微量元素。用IC50衡量玻璃海鞘不同極性萃取物的抗氧化能力，其中正丁醇萃取物清除DPPH自由基作用最強(qiáng)；乙酸乙酯萃取物對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制作用最強(qiáng)；在一定濃度下，總抗氧化能力從強(qiáng)到弱排列順序依次為：石油醚萃取物>乙酸乙酯萃取物>正丁醇萃取物。經(jīng)過(guò)多次柱層析從玻璃海鞘中分離出三個(gè)較純的組分，其對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用均較弱，結(jié)構(gòu)初探表明，組分A8B4c5為腺苷。對(duì)玻璃海鞘正丁醇提取物的分離純化進(jìn)行活

5、性跟蹤，分離得到5種具有抗腫瘤活性的組分A1B5C3、A1B5C6、A5B2C2、A6B5及A8B2C3。組分A8B2C3對(duì)B16F0細(xì)胞有明顯的抑制細(xì)胞增殖的作用，在一定濃度范圍內(nèi)，并可以誘導(dǎo)B16F0細(xì)胞G2/M期阻滯，隨著藥物濃度的增加，G0/G1期細(xì)胞明顯減少，G2/M期細(xì)胞顯著提高，4.9 μg/mL時(shí)達(dá)到17.98％，較對(duì)照組G2/M期細(xì)胞（3.08％）明顯增多（P﹤0.01），而S期細(xì)胞也有所增加，但增加幅度相對(duì)較小。玻璃