紡錘鏈霉菌SD-07與突變株所產(chǎn)抗生素特性比較及其胞外多糖的初步研究.pdf

1、真菌感染在臨床上波及范圍廣，常用的抗真菌藥物有多烯大環(huán)內(nèi)酯類、唑類、棘球白素類、丙烯胺類、嘧啶類，每種藥物均存在一定的毒副作用，但研究發(fā)現(xiàn)多烯大環(huán)內(nèi)酯類類相對于其它種類藥物來說其毒副作用相對較低，同時也是臨床上治療真菌感染的最后用藥。但長期大量使用同樣具有導(dǎo)致腎功能衰竭和血栓性靜脈炎的毒性，因此尋找更為低毒的抗生素顯得尤為重要。
　　紡錘鏈霉菌（Streptomycese netropsis）SD-07是本實驗室2007年發(fā)現(xiàn)的一

2、株新型菌株，其所產(chǎn)抗生素為多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，相比兩性霉素B，它具有更強的抗真菌活性。SD-07具有兩種高產(chǎn)突變株163和180，為驗證三種菌株經(jīng)過5年傳代后菌株是否仍高產(chǎn)，抗生素結(jié)構(gòu)及活性是否有變化，本論文對三種菌株所產(chǎn)抗生素進行產(chǎn)量和活性的比較，同時對不同的純化方法進行了活性、穩(wěn)定性和毒性比較。
　　本實驗室在對鏈霉菌SD-07接合轉(zhuǎn)移體系的建立過程中發(fā)現(xiàn)Ca2+能夠極大地增加接合轉(zhuǎn)移的頻率，電鏡下觀察鏈霉菌SD-07菌體發(fā)

3、現(xiàn)當(dāng)Ca2+存在時其胞外多糖的產(chǎn)生量明顯比不添加Ca2+時多。為更好的闡明胞外多糖與Ca2+以及接合轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系，本論文同時對SD-07胞外多糖的發(fā)酵和結(jié)構(gòu)解析進行了相關(guān)研究。
　　研究結(jié)果如下:
　　1.抗生素相關(guān)研究結(jié)果
　　紡錘鏈霉菌SD-07的180突變株是抗生素高產(chǎn)菌株，163菌株次之，相對于原始菌株SD-07，180抗生素產(chǎn)量是其3.33倍，163菌株是其1.28倍。
　　高壓液相(High Per

4、formance Liquid Chromatography，HPLC)、液相-質(zhì)譜分析(liquid chromatography-mass spectrum，LC-MS)和抑菌實驗結(jié)果顯示三種抗生素主要成分之間并無大的差別。
　　不同的制備方法表明萃取法所制備的抗生素活性最為穩(wěn)定，分子篩所制備的抗生素最不穩(wěn)定。
　　相隔三個月的抑菌性實驗證明菌株180所產(chǎn)的抗生素粗品活性最高，隨著時間的延長，抑菌活性增加，推測可能與溶解

5、性有關(guān)。
　　就細(xì)胞毒性試驗來講中壓液相層析(Fast Pressure Liquid Chromatography，F(xiàn)PLC)是一種提純抗生素、降低毒性并提高抑菌性的好方法。
　　SOS/umu-1 acZ體系的致突變性檢測結(jié)果表明鏈霉菌所產(chǎn)生抗生素的體外致突變性為陰性，并與突變株類型和制備方法無關(guān)。
　　2.胞外多糖相關(guān)研究結(jié)果
　　胞外多糖產(chǎn)量最高時所用發(fā)酵時間為48h，培養(yǎng)基為R2YE，Ca2+對多糖的產(chǎn)

6、生有明顯的促進作用，Cu2+的抑制作用最為明顯，K+、Na+多糖產(chǎn)生幾乎沒有影響，Mg2+、Fe3+、Mn2+低濃度時促進胞外多糖的產(chǎn)生。
　　胞外粗多糖經(jīng)過醇沉和sevege法除蛋白后，隨后經(jīng)過DEAE纖維素陰離子交換柱及分子篩凝膠SephadexG-75分離得到純化多糖。
　　多角度激光光散射儀分析得知多糖主要成分平均分子量約為32.29kDa。
　　單糖組分分析表明，SD-07的胞外多糖由Fuc（巖藻糖）、Gal

7、(半乳糖)、Glc（葡萄糖）和Man（甘露糖）組成，其中Fuc∶Gal∶Glc∶Man=1.33∶1.00∶8.67∶27.33。
　　紅外光譜分析(Infrared Spectra Analysis，F(xiàn)TIR)結(jié)果證明多糖中含有甘露糖和葡萄糖，并且其構(gòu)型為β-D-葡萄糖和β-D-甘露糖。
　　本論文研究結(jié)果:篩選出穩(wěn)定高產(chǎn)高活性菌株180，其抗生素組分及抑菌活性等性質(zhì)與原始菌株SD-07無顯著差異，提示180是未來抗生素生