木質(zhì)纖維素微生物降解酶系的探究與優(yōu)化.pdf

1、為了提高來自里氏木霉的纖維素酶降解木質(zhì)纖維素的效率，我們在里氏木霉和畢赤酵母中使用異源表達(dá)技術(shù)表達(dá)并構(gòu)建了復(fù)合型酶系。來自Clostridiumstercorarium的耐熱纖維素內(nèi)切酶Cel9a和經(jīng)過熱穩(wěn)定性改造的里氏木霉胞內(nèi)β-葡萄糖苷酶Cel1b-S在里氏木霉中分別使用XYNⅡ和CBHⅠ的啟動子和信號肽序列進(jìn)行了表達(dá)分泌。Cel1b-S同樣在畢赤酵母GS115中得到了異源表達(dá)，經(jīng)鎳柱純化后與里氏木霉纖維素酶混合，并以微晶纖維素和脫

2、木素玉米芯等木質(zhì)纖維素作為底物進(jìn)行了糖化水解測試，對其纖維素降解能力進(jìn)行了高效液相色譜(HPLC)測定。
　　為了更深層次的理解絲狀真菌降解木質(zhì)纖維素的機(jī)理，我們嘗試對里氏木霉的胞外纖維素酶多聚體進(jìn)行了純化。我們使用凝膠過濾色譜(GFC)、疏水作用色譜(HIC)及離子交換色譜(IEC)對分離濃縮后的里氏木霉T1胞外蛋白進(jìn)行純化，并對經(jīng)過純化后的蛋白樣品進(jìn)行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(BN PAGE)進(jìn)行檢測。我們將在接下來的工作中嘗