滸苔(Enteromorpha prolifera)糖鏈分離與結(jié)構(gòu)解析.pdf

1、滸苔多糖具有多種生物活性,但針對(duì)滸苔糖鏈結(jié)構(gòu)的研究較少。為解析滸苔糖鏈結(jié)構(gòu),本文通過(guò)微生物發(fā)酵生產(chǎn)滸苔多糖降解酶,酶法降解滸苔多糖,結(jié)合大型儀器解析滸苔糖鏈的結(jié)構(gòu)。主要研究成果如下:
　　以熱水浸提法制備滸苔多糖,滸苔多糖含量占滸苔干重的16.4％;通過(guò)單因素確定乙醇沉淀多糖條件,以濃度15.0mg/mL的滸苔多糖加入5倍體積乙醇沉淀2h,對(duì)多糖初步純化;對(duì)滸苔多糖進(jìn)行陰離子交換層析獲得兩種多糖,命名為E-1與E-2;兩種糖鏈分別

2、經(jīng)凝膠過(guò)濾層析純化、脫鹽、冷凍干燥后,E-1呈白色固體,E-2呈淡黃色固體。
　　對(duì)E-1、E-2分別進(jìn)行糖鏈性質(zhì)與組成分析。其中E-1重均分子量103.4kDa;氣相色譜分析其單糖組成,含大量葡萄糖,少量木糖與鼠李糖,各單糖(鼠李糖:木糖:葡萄糖)摩爾比為1:4.8:57.9;該糖鏈旋光度為負(fù)值;紅外光譜表明此糖鏈不存在硫酸基與糖醛酸的特征吸收峰。E-2重均分子量620.3kDa;液相色譜分析其單糖組成,含大量鼠李糖、葡萄糖醛酸

3、、木糖,少量葡萄糖與半乳糖,各單糖(鼠李糖:葡萄糖醛酸:葡萄糖:半乳糖:木糖)摩爾比為15.2:5.3:1:1.5:4.7;該糖鏈旋光度為負(fù)值;紅外光譜出現(xiàn)表征硫酸基與糖醛酸的吸收峰;通過(guò)比濁、比色法測(cè)定,硫酸基含量占糖鏈干重的(7.7±1.1)%,糖醛酸含量占糖鏈干重的(14.4±0.2)%,說(shuō)明該糖鏈屬于酸性多糖。
　　采用儀器法解析 E-1,E-2糖鏈結(jié)構(gòu)。加入微生物發(fā)酵生產(chǎn)的滸苔多糖降解酶,于35℃酶解5h制備寡糖,對(duì)酶解

4、液進(jìn)行P4柱層析,E-1得到三種寡糖片段,對(duì)各寡糖片段一級(jí)質(zhì)譜分析,結(jié)果表明 E-1a分子量為666Da,推測(cè)為葡萄糖四糖;E-1b分子量為504Da,推測(cè)為葡萄糖三糖;E-1c分子量為342Da,推測(cè)為葡萄糖二糖。E-2得到五種寡糖片段,對(duì)各寡糖片段進(jìn)行一級(jí)質(zhì)譜與二級(jí)質(zhì)譜分析,一級(jí)質(zhì)譜結(jié)果表明E-2b,E-2c,E-2d與E-2e寡糖分子量分別為760Da,628Da,402Da,244Da; E-2b二級(jí)質(zhì)譜分析表明其單糖序列為:G